检索历史 清除

摘要目的:<br>　　心脏是哺乳动物发育过程中第一个形成的器官，血管发生及血管生成是心血管发育过程中的关键步骤，血液及营养物质通过心血管系统泵送全身组织，对胚胎发育极为重要。心肌细胞(Cardiomyocytes，CMCs)、血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells，VSMCs)是心血管系统的主要组成成分，CMCs和VSMCs的增殖、分化受损将导致多种心血管疾病的发生。TEAD1与CMCs、VSMCs基因的MCAT元件结合，在血清应答因子SRF、Myocardin等协同作用下，调控MCAT元件依赖性肌特异性基因的表达。Pitx2是介导心血管左右不对称发育的关键信号分子，Pitx2c与Myocardin在CMCs、VSMCs分化过程中起着重要作用。然而，Pitx2c和Myocardin的调节表达机制，及Pitx2c和Myocardin在调节平滑肌特异性基因表达中的功能关系仍不清楚。TEAD1对血管发育的影响及TEAD1与Pitx2c之间调控作用关系的文章未见报道。本文以SM22a-Cre为启动子，在CMCs、VSMCs特异性敲除TEAD1基因，揭示TEAD1在心血管发育过程中的作用，着重探讨TEAD1对于VSMCs分化的影响及机制。为临床上预防、治疗心血管系统疾病提供新的理论基础。<br>　　方法:<br>　　1.动物实验:通过SM22a-Cre+，TEAD1F/W转基因小鼠与TEAD1F/F，mTmG+/+转基因小鼠杂交，得到心血管系统特异性敲除TEAD1的小鼠模型，观察敲除TEAD1对心脏、血管发育的影响。<br>　　2.体外细胞实验:应用TEAD1基因缺失的VSMCs、MEFs细胞，在细胞水平探索TEAD1对VSMCs分化的影响，应用荧光素酶活性分析、染色质免疫沉淀等方法，阐明其分化调控机制。<br>　　结果:<br>　　1.SM22-Cre转基因介导CMCs、VSMCs特异性TEAD1敲除后，由于CMCs、VSMCs增殖、分化受损，导致心脏和血管壁发育不良，出现严重的心血管发育缺陷，胚胎于E14.5死亡。RNA-seq分析显示，CMCs、VSMCs中TEAD1基因缺失，肌收缩相关基因及与CMCs、VSMCs分化密切相关的转录因子Pitx2c、Myocardin表达水平显著下调。<br>　　2.体外结果表明，过表达Pitx2c、Myocardin，能挽救TEAD1基因缺失所导致的VSMC分化不良。Pitx2c是TEAD1的直接转录靶基因，Pitx2c与Myocardin协同作用，促进平滑肌基因的表达。<br>　　结论:<br>　　Hippo信号通路成员TEAD1，在小鼠胚胎心血管发育过程中起着关键的调控作用，TEAD1通过靶向作用Pitx2c、Myocardin调控平滑肌基因的表达，促进VSMCs分化成熟。