换一批
换一批摘要利用双向电泳技术对培养在含不同盐浓度条件下(NaCl,0.5mol/L、1.5mol/L、3.0mol/L)的巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)细胞的总蛋白进行分析,发现在NaCl3.0mol/L的盐浓度上巴氏杜氏藻出现新的特异蛋白,其pI值约为9.0,分子量约为62KD.将分别培养在上述不同浓度下的巴氏杜氏藻细胞RNA反转录成cDNA.用3条dT<,11>(A/C/G)锚定引物和12条随机引物组合进行扩增,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,用银染的方法进行染色,可显示它们之间的7条差异DNA条带.从凝胶中回收差异DNA条带并进行再扩增,将扩增产物克隆进pUCm-T载体.经限制性核酸内切酶检定和RNA斑点杂交排除假阳性后得到一个重组质粒pTE,其中含有分子量约为420bp的在高盐下特异出现的条带,它可能与该藻的调渗基因有关.实验表明,mRNA反转录差异显示PCR是一种简单、快捷、有效的分离差异表达基因的方法.利用上述420bp的cDNA将可能从巴氏杜氏藻基因组文库中分离得到它的与耐盐相关的基因(组).
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