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摘要胃癌是一种全球范围内高发病率和高死亡率的恶性肿瘤，早期胃癌缺乏特异性表现，临床上大多数胃癌病例在确诊时已处于中晚期，尽管新的诊断技术和治疗方法如外科于术、抗肿瘤治疗、免疫治疗、分子靶向药物等被不断开发，但胃癌患者的5年生存率仍偏低。因此寻找新的肿瘤标志物及治疗靶点，探究其在胃癌中的功能及作用机制，对胃癌的诊断及治疗有重要作用。<br>　　环状RNA(circRNA)是内源竞争RNA(competing endogenous RNAs，ceRNA)中的一员，不同于线性RNA，它通过反式剪接使3'端和5'端共价结合形成闭合的环状结构，具有高度稳定性，生物进化保守性和组织特异表达性特点。目前研究发现，circRNA在肿瘤的发生发展中发挥重要的调控作用。迄今为止，circGLIS2在肿瘤的发生发展中的作用机制研究较少。本研究通过体外、体内实验揭示了circGLIS2与胃癌发生、发展的关系，circGLIS2在胃癌中低表达，可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。体外实验验证circGLIS2/miR-558/MLKL调控网络在胃癌中的作用，通过免疫荧光素酶报告基因和功能回复实验证实miR-558、MLKL对circGLIS2的作用，表明circGLIS2可通过circGLIS2/miR-558/MLKL调控网络影响细胞的增殖、迁移和侵袭，circGLIS2/miR-558/MLKL通路是胃癌治疗的潜在靶点。<br>　　第一部分 胃癌中circRNA的筛选及验证<br>　　目的：探究胃癌中circRNA差异表达谱。<br>　　方法：选取8例胃癌及相应癌旁组织进行基因芯片筛查，随机筛选10种表达下调的circRNA，在31例胃癌组织及相应癌旁组织中应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行验证。<br>　　结果：在胃癌及癌旁组织中差异表达下调(差异≥1.5倍，P＜0.05)的circRNA共761种，Q-PCR进一步验证显示，hsa_circ_0089762、hsa_circ_0036592、circGLIS2(hsa_circ_0005692)、hsa_circ_0000141四种circRNA的相对表达量分别为0.431±0.163、0.689±0.110、0.6310.165、0.633±0.171，差异有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　结论：circGLIS2在胃癌中表达下调，与肿瘤发生呈负相关。<br>　　第二部分 体外研究circGLIS2对胃癌增殖、迁移、侵袭的影响<br>　　目的:体外研究circGLIS2对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。<br>　　方法:构建过表达hsa_ circ_ 0089762、 hsa_circ_0036592、 circGLIS2(hsa_circ_0005692)、 hsa_circ_0000141四种circRNA的慢病毒载体质粒，瞬转BGC-823细胞，Q-PCR验证转染效率;Q-PCR检测胃上皮细胞GES-1及不同胃癌细胞株中circGLIS2表达差异;构建稳定过表达circGLIS2的胃癌细胞株BGC-823及稳定下调circGLIS2的细胞株HGC-27;采用CCK-8法测定肿瘤细胞的增殖能力，通过划痕实验检测肿瘤细胞的迁移能力，采用Transwell侵袭实验检测肿瘤细胞的侵袭能力。<br>　　结果:在BGC-823细胞中hsa_circ_0089762、hsa_circ_0036592、hsa_circ_0005692均转染成功，但hsa_circ_0000141未监测到表达;细胞增殖实验、划痕实验、侵袭实验结果显示，与对照组相比，过表达circGLIS2胃癌BGC-823细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。与正常胃上皮细胞GES-1比较，circGLIS2在不同胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823、MGC-803、MKN-45、HGC-27表达均下调，且均有统计学意义(P＜0.05)。在HGC-27细胞中，circGLIS2沉默显著促进细胞的增殖、迁移和侵袭能力，差异有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　结论:circGLIS2在胃癌中表达下调，且可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。<br>　　第三部分 circGLIS2/miR-558/MLKL调控网络在胃癌中的作用<br>　　目的:探讨circGLIS2/miR-558/MLKL调控网络在胃癌中的作用及对胃癌细胞的生物学行为的影响。<br>　　方法:双荧光素酶报告实验验证与circGLIS2存在特异性结合的miRNA以及与miRNA存在结合的下游靶基因mRNA;荧光定量PCR及Western Blot验证circGLIS2过表达或沉默对下游靶基因表达的影响;通过功能回复实验进一步验证circGLIS2对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。<br>　　结果:双荧光素酶报告实验证实circGLIS2与miR-558以及miR-558与靶基因MLKL特异性结合;circGLIS2过表达显著促进MLKL基因mRNA和蛋白的表达，此种促进作用miR-558mimic转染完全逆转;反之，circGLIS2沉默显著抑制MLKL基因mRNA和蛋白的表达，此种抑制作用miR-558 inhibitor转染完全逆转;通过miR-558及MLKL功能回复实验进一步验证circGLIS2/miR-558/MLKL调控网络对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。<br>　　结论: circGLIS2/miR-558/MLKL通过竞争性内源性RNA机制影响胃癌的增殖、迁移及侵袭。<br>　　第四部分 体内研究circGLIS2对胃癌细胞成瘤的作用<br>　　目的:体内实验验证circGLIS2对胃癌细胞的成瘤作用。<br>　　方法:构建Balb/c裸鼠皮下成瘤模型，每5天记录肿瘤生长曲线及重量变化直至第25天;体积计算方法:V=a×b2/2，a为长径，b为短径。肿瘤组织切片免疫组化检测MLKL的表达水平。<br>　　结果:circGLIS2过表达显著抑制BGC-823细胞的成瘤能力;circGLIS2沉默显著促进HGC-27细胞的成瘤能力。免疫组化结果显示过表达circGLIS2可上调MLKL表达;反之，沉默circGLIS2则下调MLKL表达。<br>　　结论:circGLIS2在体内可抑制胃癌细胞成瘤，并可上调MLKL的表达，与体外实验结果相符。