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摘要粘质沙雷氏菌生长过程中会产生一种次级代谢产物灵菌红素。灵菌红素具有多种的生物活性，能够抗疟疾、抗肿瘤、免疫抑制等。野生型粘质沙雷氏菌产生的灵菌红素产量少，不能满足工业化生产的需求。单优化培养基也不能使灵菌红素的产量有很大的提高。随着生物技术的发展，通过基因工程研究粘质沙雷氏菌的产灵菌红素基因，提高灵菌红素的产量是一条可行的途径。<br>　　论文通过平板划线法从湖水中分离纯化得到的一株产色素菌株。用引物27F和1492R对菌株进行16SrDNA扩增。测序结果与NCBI基因库中比对分析，确定菌株的属种。然后，采用甲醇提取菌体中色素，将粗提取物进行柱层析分离、纯化，获得较纯的红色色素。采用可见光光度计，傅里叶红外光谱(FTIR)，高效液相色谱与质谱联用(LC-MS)分析鉴定红色色素。论文还研究了灵菌红素基因克隆及载体的构建。根据NCBI查找到的菌株同源序列，分别设计了含酶切位点的灵菌红素合成酶引物和非编码序列的引物。对灵菌红素合成关键酶基因pigF和pigC进行扩增，并与pBM20-T载体连接，转化筛选获得克隆菌株。扩增灵菌红素基因簇前端的非编码序列，通过重叠PCR(Overlap PCR)将非编码序列同克隆基因拼接得到重组基因。将重组基因连接pBM16A-T后，转入粘质沙雷氏菌中，通过SDS-PAGE分析重组基因表达情况。论文得到以下结果:<br>　　1.经过多次划线分离，获得一株产红色色素细菌。16SrDNA测序结果显示菌株与粘质沙雷氏菌具有98％的相似度。使用酸性甲醇提取得到色素粗提取物，经柱层析分离得到纯化的红色色素，确定最佳展开剂为石油醚∶乙酸乙酯=4∶1。薄层色谱对红色色素分析，其Rf=0.35。使用可见光光度计扫描400-700nm波长，图谱显示色素的最大吸收峰在535nm。使用FTIR分析红色色素，结果表明色素的主要吸收波数为3436cm-1、2860cm-1、2924cm-1和1628cm-1。使用LC-MS分析，图谱显示主要离子峰为324.5m/z和325.5m/z。分析结果与已知灵菌红素结构特征对比，认定红色色素为灵菌红素。据此，获得了一株产灵菌红素的粘质沙雷氏菌。<br>　　2.用设计的引物分别扩增出合成酶pigF和pigC基因为1200bp和2700bp。将pigF和pigC基因扩增产物与pBM20-T载体连接，转化大肠杆菌DH5α，挑取连接成功的克隆子测序。测序结果与NCBI比对，结果显示pigF和pigC基因与沙雷氏菌FS14的同源性最高。用引物扩增出非编码区的coa-1基因为600bp。经OverlapPCR，将coa-1基因部分序列与pigC和pigF基因拼接，重组为coa-pic和coa-pif基因。然后分别与pBM16A-T载体连接，转化大肠杆菌DH5α，挑取连接成功的克隆子测序。测序结果与NCBI比对，结果显示coa-1与pigC、pigF序列重组成功，构建出pBM16A-coa-pif和pBM16A-coa-pic质粒。<br>　　3.构建出的质粒转入粘质沙雷氏菌中筛选出重组子S.m-pif和S.m-pic。用SDS-PAGE分析重组子的蛋白表达，电泳结果显示重组子都正确表达出蛋白质条带。通过比对细菌生长中色素吸光度变化，发现S.m-pif菌株灵菌红素产量相比野生菌株提高了6.8％而S.m-pic菌株相比野生菌株提高了17.1％。灵菌