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摘要目的:1.对两色金鸡菊醇提物(Ethanol extract，ETE)进行分离纯化，筛选出一个稳定的单体化合物提取制备工艺。2.对单体的提取工艺进行放大实验，并进行纯化，用于标准品的生产。3.按照上报国家标准委材料要求，完成标准样品纯度检查及标准样品的结构确认。4.按照上报国家标准委材料要求，完成标准样品的均匀性检测。5.检测两色金鸡菊ETE和奥卡宁的抗血小板聚集作用。方法:1.采用大孔吸附树脂柱层析、聚酰胺柱层析、硅胶中压柱层析、SephadexLH-20柱层析等方法，分离纯化两色金鸡菊ETE部位，并筛选出一个稳定的单体制备工艺。2.采用硅胶中压柱层析系统对奥卡宁制备工艺进行放大实验，得到一稳定的奥卡宁制备方法，然后采用反溶剂重结晶法得到纯度较高的奥卡宁。3.采用HPLC、TLC、红外光谱、质谱、核磁共振等方法对得到的奥卡宁标准样品进行纯度检查和结构确认。4.按照上报国家标准委材料要求，采用HPLC面积归一化法检测奥卡宁标准品的均匀性。5.建立二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate，ADP)、凝血酶诱导的血小板聚集模型，采用Born比浊法，以血小板聚集抑制率为指标，观察两色金鸡菊ETE和奥卡宁抗血小板聚集作用。结果:1.聚酰胺柱层析得到的黄诺玛苷的纯度为94.4％，收率为4.73％;硅胶中压柱层析得到的奥卡宁的纯度为75.4％，收率为18.4％;SephadexLH-20柱层析得到的马里苷的纯度为80.7％，收率为10.2％。2.硅胶柱的柱体积放大2倍时，得到的奥卡宁的纯度为78.7％，收率为15.3％;硅胶柱的柱体积放大4倍时，得到的奥卡宁的纯度为95.7％，收率为15.0％;硅胶柱柱体积放大10倍时得到的奥卡宁的纯度为94.2％，收率为16.6％。3.经过结构鉴定，两个单体化合物鉴定为奥卡宁和黄诺玛苷。4.奥卡宁标准样品的不均匀性不确定度远小于方法重复性标准偏差，认为被抽检特性均匀性很好，在特性值合成不确定度中可以不考虑不均匀性不确定度量。5.与空白对照组相比，两色金鸡菊ETE中、高剂量组可以显著抑制ADP和凝血酶诱导的血小板聚集(P＜0.05或P＜0.01);奥卡宁中、高剂量组对ADP和凝血酶诱导的血小板聚集抑制作用显著(P＜0.05或P＜0.01)。结论:1.中压硅胶柱层析法对两色金鸡菊ETE有较好的分离作用，并且收率较高，优势明显。2.中压硅胶柱层析法放大工艺稳定，适合用于标准样品的生产。3.通过结构鉴定，确定两个单体化合物分别是奥卡宁和黄诺玛苷。4.奥卡宁标准样品的均匀性很好。5.初步推测两色金鸡菊ETE抑制ADP和凝血酶诱导的血小板聚集时，奥卡宁可能发挥主要的活性作用。