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摘要细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine Induced Killer，CIK)，是由多种细胞因子如白细胞介素-2(IL-2)、干扰素(IFN)和CD3单克隆抗体等诱导而成的对多种肿瘤具有杀伤活性的细胞毒性T细胞。近年来，随着现代医学的发展，医疗技术不断的取得振奋人心的进步，以生物技术为基础的新兴治疗手段，尤其是细胞治疗发展迅速，其中CIK细胞治疗的应用更为广泛。<br>　　等密度离心法是一种在细胞生物学中广泛用于富集特定细胞的技术方案，由于所选择的液体介质的密度等于或略大于欲富集的目的细胞，因此目的细胞在离心作用下，无论离心时间长短，都将无法穿透液体介质的界面沉到离心容器的底部，进而在液体介质的界面处(即平衡位置)得到富集。典型的等密度离心法是利用单次密度梯度离心法纯化血液或骨髓样本中的淋巴细胞，其中所采用的液体介质通常是含有聚蔗糖.碘化物组合配方的具有生理渗透压的水溶液。<br>　　本研究通过收集脐带血样本，研究单个核细胞得率和纯度以及CIK细胞得率，优化单个核细胞分离方案，并系统性地优化CIK细胞制备方案。主要完成以下工作。<br>　　1.建立脐带血样本库。根据脐带血血量的不同，选择性地收集新生儿脐带血样本近30例，其中脐带血血量不超过50mL的样本10例，血量在50mL至100mL之间的样本10例，血量大于100mL的样本10例。将以上样本进行分组，考察不同样本量对单个核细胞分离的影响，为后续分离条件优化及CIK细胞诱导条件优化奠定了坚实的基础，具有重要意义。<br>　　2.采用密度离心法收集脐带血中单个核细胞。发现Ficoll-PaqueTM PLUS对单个核细胞分离效果优于NycoPrepTM1.077，与DH分离介质的分离效果无明显差异;按照稀释脐血样本与分离液1∶1的比例铺血，采用800×g，15min的离心参数，能够减少时间成本;脐带血血量与血液保存液比例越大，单个核细胞的得率和纯度越高。<br>　　3.采用CIK细胞诱导培养，在6孔板内加入3*10^6细胞，加入含1000U/mLINF-γ无血清培养基，37℃，5％CO2培养24h，加入50ng/mL anti-CD3、300U/mL IL-2，继续培养，3天后，进行传代，每孔接种细胞3*10^6个，补充IL-2至300U/mL。分别在第6天和第14天对CIK细胞进行流式分析，发现脐带血血量与血液保存液比例对诱导培养后的CIK细胞纯度无明显影响。<br>　　以上结果表明羟乙基淀粉和泛影酸钠组合的分离液，更容易实现临床治疗用途，在采集脐带血时，提高脐带血血量与血液保存液比例，可以提高单个核细胞的得率和纯度，进而诱导培养出更多的CIK细胞用于治疗，能够明显改善治疗效果，对临床应用有重大意义。