果蝇Shuguo和JIL--1复合物的结构功能研究-论文-万方医学网

果蝇Shuguo和JIL--1复合物的结构功能研究

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摘要Shuguo是Benjamin Czech团队通过RNAi技术筛选发现的重要蛋白因子，Zhao Zhang实验室将Shuguo敲除后会导致果蝇不育、产卵率和孵化率下降和一些转座子去抑制，但Shuguo导致果蝇不育的具体机制目前还不清楚。本文以果蝇Shuguo为主要研究对象，解析其结构并寻找与Shuguo有直接相互作用的蛋白因子，揭示其分子机制。<br>　　Shuguo全长有475个氨基酸，包括PWWP和LEDGF结构域。首先，纯化了Shuguo全长蛋白并得到晶体。但是经过解析结构发现仅含有PWWP结构域。进一步研究了C端的LEDGF结构域，得到LEDGF结构域的晶体，但并没能解析出其结构。<br>　　另一方面，通过酵母双杂交实验分别检测了Shuguo与Integrase、Menin、JIL-1等蛋白的相互作用，寻找与Shuguo相互作用的蛋白。最终发现Shuguo全长与JIL-1CTD有相互作用，进一步截短实验表明Shuguo的LEDGF结构域与JIL-1(984-1122)截短体有相互作用。经过体内酵母双杂交实验和体外ITC实验证明，片段JIL-1984-1122中含有近端结合位点以及远端结合位点，进而发现Shuguo与片段JIL-1984-1122相互作用主要依赖于近端结合位点。同时也利用GST pull-down和共表达纯化证明了Shuguo和JIL-1CTD有相互作用。最终确定了两者相互作用的关键氨基酸(JIL-1:F989、G991、F992和Shuguo:Y377)。<br>　　本论文以Shuguo为研究对象最终发现了其相互作用蛋白为JIL-1，为Shuguo的功能研究和分子基础提供了新的思路。