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摘要钩吻属于马钱科植物葫蔓藤的全草，又名断肠草，人或除了猪羊之外的其他动物误食可能会导致中毒。根据《本草纲目》记载，其具有镇痛、利尿等作用，在民间主要以“以毒攻毒”的理论将钩吻用于治疗恶性疾病，例如银屑病、癌症、焦虑等。钩吻素子(Koumine，Kou)是从钩吻中分离出来的最重要的生物碱成分，约占30％。国内外有研究表明，Kou有抗肿瘤、抗炎、免疫调节、止痛等作用，但是其中毒剂量与治疗剂量相近。前期研究发现，Kou能改变癌细胞形态，并抑制癌细胞生长速度和细胞集落的形成。为了探究钩吻对正常和癌细胞的影响，本研究选取Kou为研究对象，比较分析Kou对癌细胞和正常细胞的不同影响，并初步探究Kou的抗肿瘤分子机制。此外，还构建了稳定沉默p53基因的Vero和A549细胞系，为后续实验奠定了基础。主要研究容包括:<br>　　1.研究Kou对正常和癌细胞的不同调节作用<br>　　首先，通过流式细胞分析仪分析Kou对细胞生长周期的影响。然后，通过WestemBlot的方法检测Kou对细胞周期相关蛋白表达水平的影响。结果显示，一定剂量的Kou可以导致癌症细胞(H1299、MCF7和RKO)均出现G1期阻滞，而对于正常细胞没有明显的影响。通过检测细胞周期调节蛋白p53和p21，发现Kou能够引起癌细胞中的p53和p21蛋白的明显升高，而正常细胞中未见p53和p21表达量的升高。<br>　　2.成功构建稳定沉默p53的Vero和A549细胞系<br>　　将克隆有特异性靶向p53基因的shRNA的pBabe-U6表达载体转染至Vero和A549细胞，通过Puromycin筛选稳定沉默p53的阳性细胞克隆，命名为Vero-sip53和A549-sip53。并利用Western Blot检测Vero和A549细胞中p53的沉默效果。最后成功的构建了Vero-sip53和A549-sip53细胞系，Western Blot结果显示p53能够稳定有效的沉默。<br>　　本研究选取Kou作为研究对象，发现其对正常细胞和癌细胞有着不同的作用，其能够明显抑制癌细胞的生长，并使癌细胞生长周期出现G1期阻滞，且其对正常细胞没有明显的生长抑制。另外，稳定沉默p53的Vero和A549细胞系的成功构建，为下一步研究p53在正常和应激情况下的细胞的生物学反应奠定了重要的物质基础。