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摘要持留菌是细菌群体中一小部分发生袁型变异的耐药菌株，在高浓度抗菌药物的作用下仍可以存活，但这种抗菌药物耐受性没有遗传性。当重新培养存活下来的细菌时，其中绝大多数仍然对抗菌药物敏感，只有一小部分的持留菌产生。因持留菌在慢性感染中的重要作用而得到越来越多的重视。<br>　　本实验以铜绿假单胞菌PAO1为研究对象。前期研究结果表明细菌表面的膜结合蛋白Rm1B与胞外poly(dC)组成复合体Rm1B/poly(dC)调控着PAO1的持留菌水平。当PAO1进入生长衰亡期后复合体会原位转换为Rm1B/P-poly(dC)，导致该持留菌的数目提升100-1000倍。本研究的目的就是阐明PAO1Rm1B/poly(dC)转变为Rm1B/P-poly(dC)的分子机制。本研究主要从以下四个部分展开。<br>　　1、引发Rm1B/poly(dC)转变为Rm1B/P-poly(dC)的物质鉴定。<br>　　(1)通过实验确定引发Rm1B/poly(dC)转变为Rm1B/P-poly(dC)的物质是一个存在于生长衰亡期上清且不超过10kDa的蛋白质。<br>　　(2)将生长衰亡期上清冷冻干燥去做蛋白组测序分析，筛选出一个符合条件的目标蛋白XseB。<br>　　(3)在大肠杆菌BL21中诱导表达、纯化XseB融合RFP蛋白，通过体外活性验证和体内活性验证实验证明了XseB可以从5'剪切Poly(dC)和Poly(dC)/Rm1B复合物中的Poly(dC)，添加表达纯化的XseB到稳定期菌液可以使其持留菌的比例提升至跟衰亡期一样。这些研究结果都说明引发复合体Rm1B/poly(dC)原位转换的活性物质就是XseB。<br>　　2、通过构建ppGpp信号通路相关基因的突变菌株发现，XseB剪切Poly(dC)受到ppGpp控制的信号通路的调节。<br>　　3、ppGpp控制的信号通路通过激活Lon蛋白剪切XseA/XseB二聚体中的XseA，形成胞内游离的XseB。<br>　　4、通过构建exsA突变菌株阻断Ⅲ型分泌系统(T3SS)。实验结果证明突变菌株不再向胞外分泌胞内游离的XseB并且持留菌水平也不再上升。