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摘要本文从以下两部分进行了阐述：<br>　　第一部分:石蜡包埋组织TNFAIP3(A20)基因编码区测序方法的建立<br>　　目的:构建石蜡包埋组织肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(tumor necrosisfactor-α induced protein3，TNFAIP3/A20)基因编码区测序方法，为后续的基因突变研究奠定基础。<br>　　方法:运用Primer Premier5.0软件设计PCR扩增引物，采用Qiagen DNA提取试剂盒从石蜡包埋组织样本提取DNA，进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测扩增的目标产物，最后将扩增的PCR产物进行DNA测序，测序结果与Genbank(Gene ID:7128)序列进行比对。<br>　　结果:设计的引物能够成功扩增出目标条带;琼脂糖凝胶电泳检测显示PCR扩增条带清晰，未见明显杂带和二聚体;PCR扩增产物测序结果与Genbank(Gene ID:7128)基因编码区序列完全一致。<br>　　结论:成功构建了淋巴瘤石蜡包埋组织样本A20基因编码区测序方法，为后续进行A20基因突变研究奠定基础。<br>　　第二部分 弥漫大B细胞淋巴瘤TNFAIP3(A20)基因突变检测及其与临床病理特征的关系<br>　　目的:通过PCR产物DNA测序，检测弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse largeB-cell lymphoma，DLBCL)组织A20基因编码区基因突变，并探讨该基因突变与DLBCL临床病理特征的关系。<br>　　方法:收集广西医科大学附属肿瘤医院2010年1月到2012年12月期间住院的DLBCL42例，该组患者有完整病理资料和足够用于基因突变检测的淋巴瘤组织;采用DNA提取试剂盒提取石蜡包埋组织基因组DNA，应用PCR扩增技术和DNA测序法检测A20基因编码区的突变情况，分析基因突变情况，并结合随访资料，探讨A20基因突变与DLBCL临床病理特征之间的关系。<br>　　结果:①42例标本中有11例成功检测到A20基因突变，8例是缺失突变，3例是点突变，其中1例是错义突变（同时发生了同义突变），2例为同义突变;检测到的突变类型有G744A(R141H)、A2362G(E680E)、C2047T(S575S)、G2278A(Q652Q)。②非同义突变组（氨基酸序列改变）病例共9例，无突变组病例共33例（包括2例同义突变），突变率为21.4％(9/42)。③检测到突变的外显子包括:2号外显子突变1例;3号外显子突变6例，占基因突变组的66.67％(6/11);7号外显子突变1例，为同义突变;8号外显子突变2例（其中有1例在3号外显子同时发生了错义突变），均为同义突变，9号外显子突变2例。④9例基因突变组中，Non-GCB型6例，GCB型3例;CD10阳性3例，BCL-6的阳性5例，Mum-1阳性9例，BCL-2阳性7例，9例患者Ki-67均≥50％。⑤基因突变组患者一线治疗总有效率为55.6％(5/9)，CR率为22.2％(2/9)，PR率为33.3％(3/9)，SD率为11.1％(1/9)，PD率为33.3％(3/9)。<br>　　结论:①A20基因突变与部分DLBCL发病可能相关。②A20基因突变以缺失突变为主，缺失位点主要位于3号外显子。③A20基因突变的DLBCL均表达Mum-1，大部分表达BCL-2，增殖指数高，一线化疗反应差。