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摘要泛素连接酶能促进大量与生理/病理进程相关的蛋白的泛素化，以及经泛素蛋白酶体的降解。S-期激酶相关蛋白1(Skp1)-Cullin1(Cul1)-F-box蛋白(SCF)复合物是目前研究的比较清楚的多蛋白E3泛素连接酶。近来，开发可用于癌症治疗的SCF E3泛素连接酶抑制剂越来越受到关注，作为SCF复合物装配的中心调节蛋白，Skp1成为一个潜在的药理靶标。通过大量的计算分析(包括基于结构的虚拟筛选(SBVS)和分子动力学模拟(MD))，确定了一些化合物，然后通过不同的实验方法进行了验证、评估。具体来说，用纯化好的Skp1蛋白，通过热稳定性迁移实验(TSA)、表面等离子共振成像(SPRi)和荧光偏振(FP)测定了化合物与Skp1的体外结合活性。接下来，细胞水平的EC50评估表明化合物＃12是作用于Skp1的有效命中化合物。此外，还确定了化合物Z0933M（最近报道的一个抗结核化合物）是一个有效的SCF E3连接酶的小分子抑制剂。通过一系列的计算、体外和细胞水平实验，证明Z0933与Skp1的结合口袋位于Skp1的F-box蛋白结合表面上，Z0933的结合能够抑制Skp1与F-box蛋白的相互作用，进而破坏SCF E3连接酶复合物的形成，最后导致泛素依赖蛋白降解和信号不足、细胞周期进展损害和诱导氧化压力响应。Z0933M对不同类型的癌细胞显示了较广泛的抗增殖活性(EC50:0.25μM～4.4μM)。认为Z0933M的抗癌活性来自于其对Skp1的抑制及对p53信号通路中促凋亡基因的诱导表达。并且，Z0933M的杀伤效果似乎被凋亡、坏死和自噬等多个死亡通路的激活驱动。本研究为Z0933M作为抗癌一抗结核“二合一”活性化合物研究奠定了基础。<br>　　本工作的第二部分是基于结构的抗结核杆菌（Mtb）谷氨酸激酶(GK)别构激活剂的开发。GK是最近发现的有效抗结核药物靶标。因为Mtb GK的晶体结构还未见报道，利用同源建模的模型来进行虚拟筛选，并结合体外酶动力学方法，确定了一些能够激活GK活性的化合物，经过抗分枝杆菌评估，确定2个化合物（12a:MIC90为3.8μg mL-1，12b:MIC90为3.5μg mL-1）作为抗Mtb潜在先导化合物。