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摘要过敏(allergy)是指人体接触环境中部分对人类本身影响不大的过敏原物质所引发的一系列超敏反应现象。根据发达国家流行病学统计，超过20％的人群一生中至少患过一次过敏性疾病。值得警惕的是随着全球工业化的加速，目前多种过敏性疾病如过敏性鼻炎、过敏性哮喘的患者数量呈现逐年上升的趋势，而人类却仍未洞悉引发过敏的病理机制。<br>　　目前患者主要通过服用地塞米松抑制下游炎症反应以缓解过敏性疾病所引起的持续性症状，但是这种治疗方法给药频次较高而且给药时间较长，如遇易过敏季节，须持续给药至季节结束不可间断。<br>　　最新的几项临床实验和研究发现，人体免疫细胞特别是肥大细胞在过敏性鼻炎和过敏性哮喘等疾病中承担重要作用，而阻断肥大细胞表面表达的c-Kit蛋白可一定程度上抑制肥大细胞活化，降低炎性细胞因子产生，进而发挥抗过敏效果。因此，靶向c-Kit受体可能是对抗过敏性疾病的一个极具潜力的治疗方案。本论文的研究内容就是基于体外肥大细胞模型、体内过敏性疾病动物模型，筛选c-Kit抑制剂，确证活性化合物的治疗效果，开展成药性研究以及探索其疗效作用机制。<br>　　本论文第1章节是文献综述绪论部分，首先介绍过敏性疾病的发生、种类以及相关疾病治疗的研究进展。随后，综述参与过敏性疾病的机体免疫细胞并深入介绍肥大细胞及其表面表达的c-Kit蛋白以及下游信号通路。第1章节的最后部分，回顾治疗过敏炎症疾病的靶向c-Kit信号通路的代表性药物。<br>　　本论文第2章节利用实验室相对成熟的巨噬细胞体外抗炎药物筛选体系，筛选获得可抑制巨噬细胞促炎因子释放的抗炎小分子抑制剂。选取了目前体外最经典的RAW264.7巨噬细胞模型作为开展体外抗炎活性筛选的细胞系。首先使用经典的CCK8法进行细胞毒性分析，通过对受试化合物对巨噬细胞半数致死量(CC50)的解读获取毒性相对较小甚至无毒的受试化合物浓度。随后使用安全浓度范围的化合物开展LPS体外诱导RAW264.7细胞产生细胞炎症因子实验。实验结果表明，RAW264.7巨噬细胞系可以有效的筛选抗炎化合物，基于该体系，现已发现数个半数抑制率(IC50)显著优于c-Kit抑制剂Pexidartinib的活性化合物。<br>　　本论文第3章节建立了两种肥大细胞体外抗过敏药物筛选体系——RBL-2H3嗜碱性粒细胞筛选体系以及腹腔来源原代肥大细胞筛选体系(Peritoneal Mast Cell，PMC)以筛选获得抑制肥大细胞脱颗粒的小分子抑制剂。首先从BalB/c小鼠中分离提取原代腹腔来源肥大细胞并进行培养和观察。完成培养后，运用CCK8法检测化合物的细胞毒作用。通过对受试化合物对肥大细胞半数致死量(CC50)的解读获取毒性相对较小甚至无毒的受试化合物浓度。随后使用安全浓度范围的化合物开展anti-DNP-IgE、DNP-BSA体外刺激PMC、RBL-2H3细胞系释放氨基糖苷酶。实验结果表明，经典的RBL-2H3细胞系、腹腔来源肥大细胞可有效的筛选抑制肥大细胞脱颗粒的化合物。现已通过两个肥大细胞筛选体系发现数个半数抑制率(IC50)显著优于c-Kit抑制剂Pexidartinib的活性化合物。<br>　　本论文第4章节中建立了OVA诱导的小鼠过敏性鼻炎模型并选择具有活性的受试化合物413探索体内抗过敏疗效。首先尝试了多个OVA造模剂用量以寻找最佳造模剂量。选取BALB/c小鼠作为实验动物，使用OVA联合氢氧化铝佐剂于14天中预致敏3次，随后连续7天使用不同浓度的OVA滴鼻局部激发建立过敏性鼻炎模型。根据试验结果，使用0.75g/ml OVA诱导建立过敏性鼻炎小鼠，以评价抗炎、抗过敏活性较好的413号化合物的治疗效果。21天动物实验终点后，小鼠外周血、鼻组织粘膜被采集进行外周血IgE亚型抗体测定以及HE染色组织病理学检查鉴定。实验结果表明，受试化合物在15、30、60mg/kg下均可改善OVA诱导的小鼠过敏性鼻炎的症状。<br>　　综上所述，过敏性鼻炎是一种易复发、难以根治的鼻粘膜炎性疾病。肥大细胞介导过敏并表达大量的Fc受体、c-kit受体，释放炎性介质，其中c-kit受体是炎症、免疫性疾病及抗肿瘤药物研发的重要靶点。本课题研究发现，受试化合物以及Pexidartinib等c-Kit抑制剂给药后，过敏性鼻炎小鼠的外周血IgE水平降低，脱颗粒过敏性介质氨基糖苷酶等释放受到抑制，鼻炎组织部位的炎性粒细胞浸润减少，血管增生、炎症损伤得到一定程度改善，过敏性鼻炎的症状显著缓解。该研究对寻找确证过敏性疾病新的治疗靶点具有潜在的研究价值，对拓展过敏性疾病临床治疗策略具有指导意义。