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摘要长期有效地逆转肿瘤诱导的免疫抑制仍然是目前抗肿瘤治疗的难点。既往研究发现健脾化瘀方(JHD)具有改善肝癌免疫抑制的作用，但具体机制尚不清楚:结合相关文献研究进展，推测JHD可能通过调控髓源性抑制细胞(MDSCs)来改善免疫抑制的重要作用。<br>　　目的:<br>　　探究JHD改善皮下H22肝癌小鼠免疫抑制状态的机制，及JHD对肝癌小鼠来源的MDSCs的调控作用。<br>　　方法:<br>　　1、体内实验:建立皮下H22肝癌Balb/c小鼠模型，随机分为JHD组(n=5)及PBS组(n=5)，分别予JHD(24.96g/kg/day)和PBS灌胃处理12天，每日测量肿瘤体积。免疫荧光标记联合流式细胞术检测脾脏和骨髓MDSCs、Treg、Th17、Th1、Th2、CTL、巨噬细胞和树突状细胞、粒细胞比例。脾脏H&E染色观察组织结构。<br>　　2、体外实验:免疫磁珠法分选肝癌小鼠来源的MDSCs，予JHD和奥沙利铂干预后用CCK-8法检测细胞活力、Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡、细胞表面标志检测细胞分化。体外诱导MDSCs，给予JHD刺激后，流式细胞术检测细胞内活性氧。T细胞体外增殖抑制试验检测JHD处理后的MDSCs的增殖抑制能力。<br>　　结果:<br>　　体内实验<br>　　1、健脾化瘀方显著延缓皮下H22肿瘤的生长，并在体内外抑制H22肝癌细胞的增殖和活性。<br>　　2、健脾化瘀方显著减轻脾脏重量和脾脏组织结构破坏。<br>　　3、健脾化瘀方显著增加脾脏CD11b+Gr-1+细胞、脾脏和骨髓CD11b+Ly6G+细胞、及脾脏CD11b+Ly6C+细胞比例。<br>　　4、健脾化瘀方显著增加脾脏中的树突状细胞比例。<br>　　5、健脾化瘀方不显著影响脾脏和骨髓CD11b-Gr-1+粒细胞比例。<br>　　6、健脾化瘀方显著增加脾脏CD8+IFNγ+细胞比例，并显著减少Treg和Th17细胞比例。<br>　　体外实验<br>　　1、健脾化瘀方浓度小于250μ g/ml时增加MDSCs细胞活力，而浓度大于250μ g/ml时抑制MDSCs细胞活力。<br>　　2、刺激24小时后，健脾化瘀方组(250μ g/ml、500μ g/ml)和奥沙利铂组的早期凋亡细胞显著增加;500 u g/ml健脾化瘀方组和奥沙利铂组的晚期凋亡细胞较对照组显著增加。刺激36小时后，健脾化瘀方(250μ g/ml、500μ g/ml)显著减少MDSCs的早期凋亡和晚期凋亡。<br>　　3、刺激36小时后，健脾化瘀方显著增加F4/80+细胞的比例，并减少CD11c、CD80、MHCII+细胞的比例。刺激48小时后，健脾化瘀方显著增加表达F4/80、CD11c、CD80、MHCII分子的细胞比例。<br>　　4、健脾化瘀方显著减少MDSCs的活性氧表达，<br>　　5、健脾化瘀方显著减弱MDSCs对CD4+T细胞的增殖抑制能力。<br>　　结论:<br>　　1、健脾化瘀方具有在体内外抑制H22肝癌细胞生长和增殖的作用:<br>　　2、健脾化瘀方具有通过调控MDSCs细胞活力、凋亡和分化来改善H22肝癌小鼠的免疫抑制状态。<br>　　意义:本研究进一步阐明健脾化瘀方改善肝癌免疫抑制的机制，并为寻找靶向调控MDSCs的药物分子提供研究基础。