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摘要肥胖、2型糖尿病等代谢性疾病发病率日益升高，研究脂肪分化的相关调控过程，可能为未来减重新靶点提供更全面的理论依据，为治疗代谢性疾病提供新思路。初级纤毛是一种广泛存在于各种细胞表面的细胞器，由胞内运输系统IFT形成和维持，并且通过IFT实现信号的双向传输。初级纤毛在前脂肪细胞处于生长停滞期时形成，在分化过程中发生变化，其对脂肪细胞分化具有重要意义。<br>　　在脊椎动物中，Hedgehog信号通路的维持完全依赖于初级纤毛。初级纤毛提供一个结构及功能室，使Hh通路得以应答。而Hedgehog通路与脂肪分化相关。肠细胞激酶ICK位于纤毛的基底部，可调控哺乳动物初级纤毛的长度。已有研究表明，当ICK发生突变的时候，ICK的功能缺失引起初级纤毛长度变化，且ICK突变对Hh信号通路的影响不仅取决于特定的组织和细胞环境，还取决于特定的生长发育阶段。本课题旨在研究ICK在前脂肪细胞分化中对Hedgehog信号通路的调控作用以及对其成脂分化的影响，而纤毛可能承担着介导作用。<br>　　目的:<br>　　1、观察初级纤毛在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中的定位及动态变化。<br>　　2、探究ICK及Hedgehog通路下游基因Gli1、Gli2在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中的时序表达。<br>　　3、验证抑制和激活Hedgehog信号通路对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的作用。<br>　　4、探究shRNA沉默ICK基因对3T3-L1前脂肪细胞的初级纤毛、Hedgehog信号通路以及成脂分化的影响。<br>　　方法:<br>　　1、在诱导3T3-L1细胞分化到d0、d2、d4、d6、d8时进行初级纤毛的乙酰化α-tubulin、ARL13B免疫荧光染色，激光共聚焦显微镜下观察其初级纤毛的定位，对细胞中诱导产生的初级纤毛的长度进行测量并统计。<br>　　2、在诱导3T3-L1细胞分化的d0、d2、d4、d6、d8分别提取其总RNA，qPCR检测ICK、Gli1、Gli2的mRNA表达情况。<br>　　3、用Hh信号通路的抑制剂Cy及激动剂SAG对细胞进行干预，并设置对照组，诱导分化满8天后收取细胞，qPCR检测各组Hh信号通路标志基因Gli1、Gli2、Ptch1以及成脂标志基因PPARγ、CEBPα的mRNA表达情况，油红O染色法，观察各组3T3-L1细胞内脂滴形成情况。<br>　　4、诱导分化转染ICK-shRNA组、阴性对照Vector组及空白Mock组3T3-L1细胞，在诱导分化d2时对细胞进行初级纤毛的免疫荧光染色，激光共聚焦显微镜下观察，并对初级纤毛的长度进行测量及统计。在d0、d2及d8分别提取各组细胞总RNA，检测Hh信号通路关键基因Gli1、Gli2、ptch1的mRNA表达情况以及d8时成脂标志基因PPARγ、CEBPα的mRNA表达情况。<br>　　统计分析<br>　　采用软件IBM SPSS Statistics20进行统计学分析。统计数值的表示采用均数±标准差。统计曲线及图标的制作采用图表制作软件Prism(graph pad)。每组数据均采用非配对双尾t检验进行分析。以P＜0.05表示显著性差异，P＜O.01表示极显著性差异。<br>　　结果:<br>　　1、初级纤毛存在于脂肪细胞分化过程中，且在诱导分化的d2时纤毛最长，之后逐渐变短。<br>　　2、在前脂肪细胞分化过程中，ICK在d2时mRNA表达量最低，Gli1和Gli2均在d2时mRNA表达量最高。<br>　　3、抑制Hedgehog信号通路可以促脂肪分化，激活Hedgehog信号通路可以抑制脂肪分化。<br>　　4、沉默ICK可以延长分化过程中前脂肪细胞的初级纤毛，上调Hedgehog信号通路Gli1、Gli2、ptch1的表达，并且抑制前脂肪细胞的成脂分化。<br>　　结论:<br>　　ICK是调控前脂肪细胞Hedgehog信号通路和成脂分化的关键因子，沉默ICK可以延长分化过程中前脂肪细胞的初级纤毛，激活Hedgehog信号通路，并且抑制前脂肪细胞的成脂分化。ICK可能是肥胖症等代谢性疾病预防及治疗的新靶点。