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棉铃虫口器分泌蛋白的系统分析和效应子鉴定

摘要植物-昆虫相互作用的研究中,以植物激素和转录因子(transcriptional factors,TFs)介导的信号转导和与昆虫取食有关的信号识别是两大重要的研究热点。昆虫口器分泌物在昆虫取食植物时与损伤部位直接接触,是昆虫-植物间相互交流的重要媒介。通常,研究者将其中能诱导植物免疫防御反应的活性分子称为激发子,而起到抑制作用的活性分子则称为效应子。通过非标记(Label Free)定量蛋白质组学技术,我们系统分析了咀嚼式广食性昆虫棉铃虫(Helicoverpa arm igera)的口器分泌物,发现了228个具有功能注释的蛋白,并分析了这些蛋白在取食时的相对丰度变化。我们关注了其中一个表达丰度较高,但不属于消化酶类的分泌型蛋白,命名为Highly Accumulated Secretory protein1,即HAS1。HAS1与实验室之前报道的HARP1(Helicoverpa armigera R-like Protein1)及白蚁(Coptotermes formosanus)和寄生蜂(Nasonia vitripennis)干扰宿主免疫应答的毒液蛋白具有同源性,此类蛋白在鳞翅目昆虫中广泛存在,在进化树上可被聚类到三个分支,HARP1与HAS1属于不同的分支。HAS1在棉铃虫中肠组织和口器分泌物中均有表达。通过体外损伤模拟观察HAS1进入植物组织的过程,发现HAS1-VENUS可以进入伤口周围的植物细胞,部分可以定位于细胞核中。过表达HAS1可以削弱植物对棉铃虫抗虫性。利用病毒诱导的基因沉默系统干扰棉铃虫体内HAS1的表达,可以减缓棉铃虫取食植物的生长情况。体外纯化原核表达的HAS1涂抹在植物伤口上可以显著降低植物机械损伤响应基因的诱导表达。与HARP1不同的是,HAS1几乎不与JAZs蛋白结合。通过双分子荧光互补(BiFC)和pull-down实验,我们发现HAS1可以与拟南芥中的bHLH(basic Helix-Loop-Helix)转录因子MYC3、MYC4以及棉花中的同源MYC蛋白,如Gh_A09G2341、Gh_D12G2074和GhPGF发生蛋白相互作用。同时,我们从遗传上证明了HAS1的效应子活性与拟南芥中的MYC3、MYC4有相关性。对机械损伤两小时后的转基因植物进行了转录组分析,发现HAS1可以抑制机械损伤诱导蛋白酶抑制剂,防御基因和次生代谢相关基因的表达。同时,双荧光素酶报告系统证实了HAS1与bHLH类转录因子的相互作用,干扰了转录因子对靶基因的转录激活。这一研究对咀嚼式昆虫效应子的发现及其分子机制的探究提供了新的线索。

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导师 陈晓亚
学位信息:
中国科学院大学 基础医学 遗传学(博士) 2019年
发布时间 2021-04-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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