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摘要背景:骨肉瘤(osteosarcoma，OS)是儿童及青少年较常见的一种恶性骨肿瘤，起源于间叶组织，治疗包括对局部病灶手术切除并结合围手术期化疗。随着手术技术及化疗方案的进步，骨肉瘤患者的预后得到了改善，但是病人的存活率并没有得到显著提升，局限性骨肉瘤的患者5年无瘤生存率(event free survival，EFS)约为70％，而转移性或复发性疾病患者的总体生存率低于20％，30多年来未有突破。因此，随着对骨肉瘤发生、发展分子机制的深入研究，探讨区别于传统疗法的OS生物靶向治疗成为临床和基础研究的热点。<br>　　近来研究发现v-MAF鸟类肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物G(V-Mafavian musculoaponeurotic fibrosarcoma onco-gene homolog G，MAFG)在正常人组织中表达很低，但在肿瘤组织中表达显著增强，提示MAFG是又一潜在的促癌因子。但是在骨肉瘤中表达及功能尚无研究报道。<br>　　本研究拟行MAFG在骨肉瘤细胞及人骨肉瘤组织中表达的检测，探讨MAFG的表达对骨肉瘤细胞的生物学功能的影响，同时探讨miRNA-4660与MAFG的相互关系，为寻找骨肉瘤治疗寻找新的靶点。<br>　　方法:<br>　　1.运用实时定量PCR(Real-time quantitative PCR，qRT-PCR)，蛋白质免疫印迹实验(Western blotting)研究人骨肉瘤组织、瘤旁组织以及MG-63，U2OS人骨肉瘤细胞中MAFGmRNA及蛋白表达水平。<br>　　2.通过shRNA、CRISPR/Cas9、病毒基因载体构建与稳转细胞建立等办法靶向沉默、敲除和过表达MAFG，观察处理后对OS细胞生长、增殖、迁移和侵袭以及细胞凋亡等的影响。<br>　　3.运用病毒基因载体构建与稳转细胞建立表达野生型和突变的miRNA-4660，观察其对OS细胞中MAFG的表达情况，进一步探究miRNA-4660在细胞生长、增殖、迁移和侵袭以及细胞凋亡等方面的调控作用。<br>　　结果:<br>　　1.MAFGmRNA的表达在人体骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞中显著升高，其在在骨肉瘤周围正常骨组织中表达相对较低。Westernblot检测显示在OS肿瘤组织MAFG，HMOX1蛋白也显著上调。<br>　　2.在U2OS，MG63细胞系和原代骨肉瘤细胞中，MAFGshRNA可有效抑制细胞生长，增殖，迁移和侵袭，同时引起细胞凋亡。此外，使用CRISPR/Cas9基因编辑方法敲除MAFG同样抑制了OS细胞的生长，增殖，迁移和侵袭。相反，在OS细胞的外源性过表达MAFG促进细胞生长，增殖和迁移。<br>　　3.生物信息学分析发现，MAFG3'-UTR(非编码区)和miRNA-4660存在相互结合的位点;OS细胞中miRNA-4660过表达抑制MAFG的表达;抑制OS细胞中miRNA-4660可上调MAFG的表达;同时发现OS细胞中miRNA-4660过表达抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭，诱导细胞凋亡。<br>　　结论:MAFG过表达可促进OS细胞的进展。miRNA-4660可以抑制MAFG的表达和OS细胞进展。