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摘要第一部分:川陈皮素抑制IL-21/IL-21R介导类风湿关节炎的炎症反应体外研究<br>　　目的:充分探讨川陈皮素靶向IL-21调控类风湿关节炎免疫应答过程，确定其与IL-21/IL-21R及JAK1/STAT3信号通路在调控过程中的介导关系，确定川陈皮素在类风湿关节炎发生、发展过程中的价值性，为后期临床治疗类风湿关节炎提供研究方向。<br>　　材料与方法:MH7A细胞系使用含10％胎牛血清的1640完全培养基于37℃、5％C02、100％的恒温培养箱中培养，具体分组如下:Control组(不做处理);IL-21组(50ng/mlIL-21处理MH7A细胞);IL-21+Nobiletin25μM组(50ng/mlIL-21+25μmol/LNobiletin处理MH7A细胞);IL-21+Nobiletin50μM组(50ng/mlIL-21+50μmol/LNobiletin处理MH7A细胞);MH7A细胞干预结束后，继续培养48小时后进行相关项目分析:细胞因子分析:ELISA检测各组细胞中IL-6、TNF-α、HMGB1、MMP-3、MMP-13表达浓度分析;各组MH7A细胞ROS(活性氧)检测;各组MH7A细胞4-HNE(4-羟基壬烯醛)检测;RT-PCR检测IL-21R、IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-13表达浓度分析;Western-blot检测IL-21R、及JAK1/STAT3信号通路关键蛋白表达分析;统计数据，给出结论。<br>　　结果:ELISA化学检测:IL-6、TNF-α:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，各组数据比较，P＜0.05，差异具有统计学意义;HMGB1蛋白:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，各组数据比较，P＜0.05，差异具有统计学意义;MMP-3、MMP-13:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，各组数据比较，P＜0.05，差异具有统计学意义;<br>　　4-HNE检测:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，各组数据比较，P＜0.05，差异具有统计学意义;<br>　　ROS检测:各组MH7A细胞中的ROS表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，各组数据比较，P＜0.05，差异具有统计学意义;<br>　　RT-PCR检测:IL-21R:各组MH7A细胞mRNA表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，各组数据比较，P＜0.05，差异具有统计学意义;IL-6、TNF-α:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，各组数据比较，P＜0.05，差异具有统计学意义;MMP-3、MMP-13:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，各组数据比较，P＜0.05，差异具有统计学意义;<br>　　Westwen-blot检测:IL-21R:各组MH7A细胞蛋白浓度表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，各组数据比较，P＜0.05，差异具有统计学意义;JAK1/STAT3信号通路:各组MH7A细胞中JAK1、STAT3蛋白表达差异性较小，P＞0.05，差异不具有统计学意义;在其磷酸的表达过程中，各组MH7A细胞中的表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，各组数据比较，P＜0.05，差异具有统计学意义。<br>　　结论:(1)川陈皮素可以靶向IL-21受体对MH7A细胞做出免疫应答过程，明显降低MH7A滑膜细胞内白细胞介素以及基质金属蛋白酶等浓度变化，缓解MH7A滑膜细胞的炎性进展过程，促进其修复过程，且随着川陈皮素浓度增加，这种趋势更加明显。<br>　　(2)川陈皮素可以靶向IL-21受体对细胞经典信号通路JAK1/STAT3进行调控应答，降低细胞信号通路关键蛋白JAK1及STAT3等蛋白的磷酸化水平，减缓炎症过程，与上文的结论具有一致性。由此可以得知，川陈皮素在类风湿关节炎的发生、发展过程中可能具有潜在的研究价值，为后期临床治疗类风湿关节炎提供靶向研究导向。<br>　　第二部分:川陈皮素抑制IL-21/IL-21R介导类风湿关节炎的炎症反应体内研究<br>　　目的:在体外研究的基础上，体内研究进一步探讨了川陈皮素靶向IL-21调控类风湿关节炎的免疫应答过程，从而明确了其与IL-21/IL-21R及JAK1/STAT3信号通路在调控过程中的介导关系，表明了川陈皮素在抗类风湿关节炎症作用方向的价值性，为后期临床治疗类风湿关节炎提供研究方向。<br>　　材料与方法:选取48只Wistar大鼠适应性饲养1周后将其随机分成4组，除去对照组大鼠，其余建立CIA模型;具体分组如下:Control组(大鼠不做处理);IL-21组(CIA模型+50ng/mlIL-21，腹腔注射);IL-21+Nobiletin25μM组(CIA模型+50ng/mlIL-21+25μmol/LNobiletin，腹腔注射);IL-21+Nobiletin50μM组(CIA模型+50ng/mlIL-21+501μmol/LNobiletin，腹腔注射);继续饲养6周后将大鼠处死，进行相关项目分析:各组大鼠模型成功率检测:大体观察、体重指数、关节炎、关节指数分析;形态学分析:各组大鼠HE染色分析;ELISA检测分析:IL-21R、TNF-α、IL-6、HMGB1、MMP-3及MMP-13蛋白;RT-PCR检测分析IL-21R、TNF-α、IL-6、MMP-3及MMP-13mRNA表达分析;Western-blot检测分析IL-21R、TNF-α、IL-6、MMP-3及MMP-13及JAK1/STAT3通路分析，分析数据，给出结论。<br>　　结果:模型成功率检测:临床表现:对照组大鼠精神状态较好，体重体现出稳步增长的趋势，毛发光泽性较差;模型组大鼠意志沉迷，进食量逐渐减少，毛发光泽性，2周后处于无法负重的状态;体重变化:两周后各组大鼠的体重变化趋势为IL-21＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21+Nobiletin50μM＜Control，各组之间体重比较，差异具有统计学意义(P＜0.05);关节炎发病率/关节指数:各组关节炎发病率比较趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，数据分析差异具有统计学意义(P＜0.05).<br>　　形态学分析:HE染色:对照组大鼠踝关节组织细胞排列密集，形态规则，轮裹明显;模型组大鼠踝关节组织细胞层变厚，白细胞和淋巴细胞大量充斥，连续性减弱;川陈皮素干预后，大鼠的踝关节组织细胞排列密集性加强，细胞形态趋于正常。<br>　　ELISA化学检测:IL-6、TNF-α:表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，P＜0.05，差异具有统计学意义;HMGB1蛋白:表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，P＜0.05，差异具有统计学意义;MMP-3、MMP-13:表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，P＜0.05，差异具有统计学意义。<br>　　RT-PCR检测:IL-21R:表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，P＜0.05，差异具有统计学意义;IL-6、TNF-α:表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，P＜0.05，差异具有统计学意义;MMP-3、MMP-13:表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，P＜0.05，差异具有统计学意义。<br>　　Westwen-blot检测:IL-21R:表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，P＜0.05，差异具有统计学意义;IL-6、YNF-α:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，P＜0.05，差异具有统计学意义;MMP-3、MMP-13:表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，P＜0.05，差异具有统计学意义;JAK1/STAT3信号通路:各组MH7A细胞中JAK1、STAT3蛋白表达差异性较小，P＞0.05，差异不具有统计学意义;在其磷酸的表达过程中，表达趋势为Control＜IL-21+Nobiletin50μM＜IL-21+Nobiletin25μM＜IL-21，P＜0.05，差异具有统计学意义。<br>　　结论:(1)川陈皮素可以较好的改善模型组大鼠关节炎效应，明显改善大鼠的精神状态，降低大鼠的类风湿关节炎症的程度及关节指数，为后续的研究提供帮助。<br>　　(2)与体外研究结果一致，川陈皮素改善大鼠类风湿关节炎症的作用主要是通过靶向机体IL-21R浓度变化进而调控JAK1/STAT3的活性状态，充分降低白细胞介素、肿瘤坏死因子-α、高迁移率蛋白表达，逐渐恢复关节软骨基质合成及分解的平衡状态，加速类风湿关节炎疾病的康复过程，达到对类风湿关节炎的治疗效果，给予临床一定启发。