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摘要研究目的:<br>　　胰岛β细胞功能障碍及受损是2型糖尿病(Type2diabetes mellitus，T2DM)恶化的原因。从中医整体理论和胰腺炎继发肾损伤的发现来看，肾胰之间存在着潜在的沟通。本研究试图阐明细胞分裂周期42(Cell division cycle42，Cdc42)是否影响足细胞凋亡并进一步损害胰岛β细胞功能。本研究首先验证高糖可以诱导Cdc42表达的上调以及小鼠足细胞MPC5的凋亡，并且调控Cdc42可以影响足细胞凋亡。之后初步建立MPC5与β-TC6细胞体外共培养模型以及MPC5与小鼠原代胰岛细胞体外共培养模型。在MPC5s中调控Cdc42后检测β-TC6以及小鼠原代胰岛细胞的胰岛素分泌及含量。<br>　　研究方法:<br>　　1.小鼠足细胞MPC5凋亡的验证:<br>　　首先通过TUNEL试验、Western blot试验以及PCR验证高糖环境（25mmol/l）可以诱导足细胞凋亡以及Cdc42和Bax表达的上调。之后验证Cdc42介导MPC5细胞凋亡的作用。<br>　　2.足细胞对β-TC6细胞以及小鼠原代胰岛细胞胰岛素分泌及含量影响情况的验证:<br>　　首先建立MPC5细胞与β-TC6细胞以及与小鼠原代胰岛细胞的共培养模型。验证调控MPC5中Cdc42的表达对β-TC6细胞以及小鼠原代胰岛细胞胰岛素分泌及含量的影响。通过胰岛素分泌试验(GSIS)以及免疫荧光检测胰岛素的分泌及含量。<br>　　研究结果:<br>　　1.高糖环境诱导MPC5细胞的凋亡以及Cdc42和Bax表达的上调:<br>　　TUNEL试验显示:高糖环境(25mmol/l)可以使MPC5细胞的凋亡增加（图2）(P＜0.05).Western blot和PCR结果显示，高糖环境（25mmol/l）可使MPC5细胞中Cdc42与Bax的表达上调（图1）(P＜0.05)。<br>　　2.调控MPC5细胞中Cdc42的表达:<br>　　应用Western blot以及PCR验证转染效果。转染Cdc42质粒的MPC5细胞中Cdc42以及Bax在蛋白质水平和mRNA水平表达均上调(P＜0.05)，转染Cdc42小干扰的MPC5细胞中Cdc42以及Bax在蛋白质水平和mRNA水平表达均下调(图3)(P＜0.05)。<br>　　3.调控MPC5细胞中Cdc42的表达影响MPC5细胞的凋亡:<br>　　TUNEL结果显示，与对照组相比，MPC5细胞转染Cdc42质粒后，其凋亡增加(P＜0.05)，转染Cdc42小干扰的MPC5细胞凋亡减少（图）(P＜0.05)<br>　　4.MPC5细胞中Cdc42的表达影响β-TC6细胞胰岛素的分泌及胰岛素含量:<br>　　胰岛素分泌试验(GSIS)与免疫荧光检测β-TC6细胞胰岛素的分泌情况以及胰岛素含量。与对照组相比，与转染Cdc42质粒的MPC5细胞共培养后，β-TC6细胞的胰岛素分泌减少，胰岛素含量减少（图6-7）(P＜0.05)，与转染Cdc42小干扰的MPC5细胞共培养后，β-TC6细胞的胰岛素分泌增加，胰岛素含量增加(图6-7)(P＜0.05)。<br>　　5.MPC5细胞中Cdc42的表达对小鼠原代细胞胰岛素含量的影响:<br>　　免疫荧光检测小鼠原代胰岛细胞胰岛素的分泌情况。与对照组相比，与转染Cdc42质粒的MPC5细胞共培养后，小鼠原代胰岛细胞的胰岛素含量并无明显变化，与转染Cdc42小干扰的MPC5细胞共培养后，小鼠原代胰岛细胞胰岛素含量增加（图9）(P＜0.05)。<br>　　研究结论：<br>　　1.高糖环境（25mmol/l）可以诱导MPC5细胞的Cdc42以及Bax表达增加，并且诱导MPC5细胞凋亡。<br>　　2.MPC5细胞中的Cdc42的表达与MPC5细胞中Bax的表达以及MPC5细胞的凋亡呈正相关。<br>　　3.共培养体系证明，MPC5细胞中的Cdc42的表达可以影响β-TC6细胞以及小鼠原代胰岛细胞胰岛素的分泌及含量，其关系为负相关。