检索历史 清除

摘要目的：<br>　　为了探讨清热解毒类中成药抗流感作用及其潜在的共性机理，本论文首先采用H1N1甲流感病毒感染小鼠模型对不同类型清热解毒类方剂抗甲型流感病毒的药效作用及其方剂组成特点进行了分析;然后选取以银翘散为主方的代表性方剂复方银花解毒方(FFYH)，采用体内外药效评价模型深入探讨其抗流感病毒的药效作用及机制，并在此基础上探讨其协同增强抗病毒药磷酸奥司他韦抗甲型流感病毒的药效作用及其潜在机理，以期为探讨清热解毒类方剂临床治疗流感的共性机制及指导抗流感创新中药方剂的研发提供理论依据。<br>　　方法：<br>　　本论文以H1N1甲型流感病毒感染ICR小鼠为模型，以死亡保护率与生存期为评价指标对比分析了40种上市清热解毒类中成药体内抗甲流感病毒的药效作用及其方剂组成特点;然后以H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒感染MDCK细胞为模型，采用CPE抑制试验和HA试验方法对上述筛选的清热解毒类代表性方剂复方银花解毒方(FFYH)体外抗流感病毒的广谱性及其药效作用进行了评价，并通过采用饮食量变化、体重变化、生存期、死亡保护率、肺病理组织变化以及血细胞变化等指标综合考察FFYH体内抗流感病毒的药效作用;采用ELISA法检测小鼠血清炎症因子表达水平，采用RT-PCR方法及Western blot法综合评价其抗流感病毒性肺炎的作用及机制;最后采用上述类似的方法探讨了FFYH和磷酸奥司他韦体内协同增强抗流感病毒的药效作用及机制。<br>　　结果：<br>　　(1)体内药效评价研究结果表明40余种清热解毒类方剂中具有抗流感病毒药效作用的方剂主要由以连翘散为主方加减而来，其中具有明显抗流感病毒的方剂有19种，其余无明显抗流感疗效。<br>　　(2)清热解毒类代表性方剂FFYH不仅体外对H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒的复制有很好的抑制作用，而且体内能显著延长小鼠的生存期，显著降低小鼠的死亡率、改善血液参数与肺组织损伤;机制研究显示FFYH体内抗流感病毒药效与其抑制TLR7、MyD88、IRAK4、IRF7、TRAF3和TRAF6的mRNA的表达而有效抑制血清及肺组织炎症因子TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-1β和IP10的产生而降低病毒性急性肺损伤有关;此机制在人肺腺癌A549细胞模型中也得到了验证，即FFYH体内抗流感病毒药效可能与其具有靶向TLR7/MyD88信号通路抑制IAV感染所引起的过激炎症反应有关。<br>　　(3)体内药效研究结果表明FFYH与磷酸奥司他韦(Ose)联合给药比FFYH或Ose单独给药在延长致死性流感病毒感染引起的急性呼吸衰竭小鼠的生存期方面存在显著优势，两者联合给药比单独给药的生存期明显延长，分别为13.7±2.1天（联合），12.6±2.6天(Ose)和10.6±3.1天(FFYH);两者联合给药的死亡保护率显著提高，分别为70％（联合），50％(Ose)和30％(FFYH)。此外，两者在改善血液学参数和肺组织损伤等多方面均具有显著优势，提示两者联合具有协同增效作用。体内药效作用机制研究表明FFYH与Ose联合给药不仅可协同增强抑制病毒的复制，而可显著抑制TLR7/MyD88炎症信号通路降低肺组织或肺细胞中应过激炎症引起的急性肺损伤。<br>　　结论：<br>　　清热解毒类方剂中具有抗流感病毒药效作用的方剂主要由清热解毒类经典方银翘散加减而来，其代表性方剂FFYH不仅体外能有效抑制多种亚型流感病毒的复制，而且体内能显著降低致死性流感病毒感染引起的死亡;FFYH与抗流感病毒药物Ose联合给药对甲流感具有协同增效作用，其机制与其能显著抑制病毒复制以及抑制TLR7/MyD88信号通路降低肺部病毒感染引起的过激炎症反应密切相关，提示靶向抑制TLR7/MyD88信号通路可能是清热解毒类中药临床抗流感的共性机制。