摘要目的:构建靶向超声纳米泡NBpAd-AAV-9/miRNA-1,测定其理化性质,观察其体外超声造影增强显影效果并对造影信号强度进行定量分析。<br> 方法:采用“机械振荡”等多种方法协同制备纳米泡NBs,用“亲和素-生物素桥接”将pAd-AAV-9/miRNA-1基因复合物与纳米泡NBs相连。通过光学显微镜观察纳米泡形态;Zeta分析仪检测纳米泡的粒径、分散度及稳定性情况;荧光共聚焦显微镜观察pAd-AAV-9/miRNA-1基因复合物与纳米泡NBs相连情况;流式细胞仪分析靶向纳米泡NB pAd-AAV-9/miRNA-1最高载病毒率及最适载病毒量;体外培养SD大鼠心肌细胞,不同浓度的NB pAd-AAV-9/miRNA-1与SD大鼠心肌细胞共孵育,用CCK-8试剂检测纳米泡对细胞是否存在毒性作用。在体外,评价两种造影剂的增强显影效果,并对造影信号强度进行定量分析。<br> 结果:NBs粒径为504.02±36.94nm,NBpAd-AAV-9/miRNA-1粒径为568.00±37.39nm,在光学显微镜下观察到形态呈圆形并大小均一;NBpAd-AAV-9/miRNA-1的粒径大小和浓度在室温下5~60min内无明显变化(P>0.05)。荧光显微镜显示pAd-AAV-9/miRNA-1基因复合物与NBs成功相连;流式细胞仪显示,当病毒量为5ul时,NBpAd-AAV-9/miRNA-1载病毒率最高达86.3±2.2%(P<0.05),最适载病毒量为5ul。不同浓度的NB pAd-AVV-9/miRNA-1对SD大鼠心肌细胞不存在细胞毒性作用(P>0.05)。NBs和NB pAd-AAV-9/miRNA-1在体外均具有良好的超声造影显影成像(P>0.05),并在30s时,NBs(70.19±0.93dB)和NBpAd-AVV-9/miRNA-1(71.59±1.44dB)(P<0.001)均达最大信号强度。<br> 结论:本研究成功制备出NBpAd-AAV-9/miRNA-1靶向纳米泡,确定了最适载病毒量,并在体外具有良好的超声造影增强显影效果。
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