检索历史 清除

摘要研究目的:<br>　　急性髓系白血病(AML)是一种造血系统发育异常的恶性肿瘤疾病，又称血癌。在AML患者中，表观遗传态势的变化是重要影响因素之一。新的研究发现，LMNA基因所表达的A型核纤层蛋白作为细胞核骨架的重要组成蛋白，不仅维持着细胞核的基本形态，还在表观遗传调控中起着重要的作用，然而在AML中表观遗传态势的变化是否与LMNA功能的异常相关还未被报道。因此亟需明确LMNA在AML中的表达情况和分子机制，从而探索LMNA作为AML潜在治疗靶点的可能性以及临床应用价值，为阐明AML的发病机制与治疗AML提供理论基础。<br>　　研究方法:<br>　　首先基于GEO等公共数据库分析AML与健康人RNA-seq数据中LMNA基因的表达，利用UNLCAN等数据库分析AML中LMNA不同表达水平与临床特征之间的关系;利用LinkedOmics网站进一步分析AML中LMNA的相关基因和这些基因富集到的调控通路，最后基于Cytoscape软件和STRING网站构建AML中LMNA与相关基因的互作网络。以生信分析数据为基础，进一步在离体细胞水平验证LMNA基因的功能。利用慢病毒转染shRNA的方式在人脐带血分离的CD34+造血干细胞中敲低LMNA，并在体外诱导向红系分化;细胞计数法分析细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞的早期分化，终末分化，凋亡水平以及脱核能力;吉姆萨染色法和电镜对细胞整体与细胞核进行形态学观察;免疫荧光染色检测细胞组蛋白标志物的变化。<br>　　研究结果:<br>　　(1)表达量分析结果显示:LMNA在健康人与AML患者中的表达水平存在显著性差异，AML患者的表达水平更高(P＜0.05)。<br>　　(2)LMNA相关生存分析结果显示:LMNA高表达患者组与LMNA低表达患者组在总体生存期中存在显著性差异，高表达LMNA的AML患者总体生存率更低(P＜0.05)。<br>　　(3)分析LMNA与兵他基因的相关性，GO富集分析结果显示:与LMNA负相关的基因集主要位于染色体区域，主要参与核糖体的合成、mRNA的转录和DNA修复，并且作为组蛋白结合蛋白和mRNA结合蛋白发挥其功能。KEGG富集分析显示:这些负相关基因主要富集在Fanconi贫血通路上。蛋白网络构建得到:与LMNA直接作用的蛋白主要在表观遗传调控上发挥功能。<br>　　(4)成功建立LMNA敲低的脐血来源CD34+细胞模型，并在体外诱导向红系分化。实验结果表明:LMNA敲低之后细胞增殖被抑制，并且细胞的凋亡比例增加;抑制了细胞的脱核;细胞核形态发生改变并且染色质结构松散;启动子区域组蛋白标志物H3K4me3定位发生改变。<br>　　研究结论:<br>　　(1)LMNA与表观遗传调控与fanconi贫血通路具有显著相关性，提示LMNA与AML中的红系发育异常高度相关，并且可以通过表观遗传修饰起作用。<br>　　(2)LMNA敲低后红系体外培养发育异常可能是H3K4me3定位改变，从而导致表观遗传态势改变引起的。