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摘要寡核苷酸药物作为基因疗法的治疗剂，可用于病毒感染，遗传性疾病和癌症等重大疾病的治疗。然而，它们在生物介质中的不稳定性和细胞内递送的效率低下仍然是实际体内应用的主要障碍。<br>　　在本硕士论文工作中，我们报道了一种环状Y形适配体-DNAzyme偶联物(circular Y-shaped aptamer-DNAzyme conjugate，cYAD)，通过对特定mRNA切割实现高效的体内基因沉默，可用于恶性肿瘤的基因治疗。使用特异性结合PTK7蛋白的Sgc8适配体与广泛应用的Na+依赖性NaA43DNAzyme构建cYAD。通过精准控温的程序性退火，在T4DNA连接酶的作用下，Sgc8适配体与NaA43DNAzyme以2∶1的摩尔比连接形成cYAD。系统研究表明，Sgc8适配体与NaA43DNAzymeDNA结构的环化不仅保留了自身功能，并可以提高其在生理环境下的稳定性。此外，二价适体基序提供了特异性和增强的目标细胞靶向能力，可以在复杂的生物环境准确地识别目标，用于寡核苷酸药物在病变部位的积累和保留。在实际的递送过程中，cYAD通过PTK7介导的细胞内吞作用进入细胞内部，在细胞内稳定保存;胞浆中大量的Na+激活DNAzyme的催化活性，迅速切割间充质上皮转化(mesenchymal-epithelial transition，MET)mRNA，从而抑制了MET蛋白的表达，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。并且，通过不同的细胞模型证明，cYAD基于细胞受体结合的基因沉默特异性。cYAD序列的可编程性，即不同核酸适配体与DNAzyme之间，甚至是不同比例的核酸适配体与DNAzyme的组合，极大的扩展了其应用于不同疾病的潜力。<br>　　本研究已在细胞实验和动物实验中证实，相较于单链适配体，单链DNAzyme，环状Y形适配体-DNAzyme偶联物在体内表现出高效的基因沉默性能。这一策略为寡核苷酸药物在体内实现精准高效的基因治疗提供了新的思路和方法。