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摘要癌症的发病率和死亡率在全球范围内持续增加，但是，癌症疗法的有效性却滞后。传统的癌症治疗方法有其缺点，这对诊断和预后提出了严峻的科学和医学挑战。<br>　　最近，科学家致力于T细胞受体免疫疗法在内的过继疗法方面的研究，在该疗法中免疫系统关键组成部分的T细胞被设计用来杀死肿瘤细胞。在T细胞表面发现的T细胞受体识别主要组织相容性复合物所递呈的抗原肽的抗原，从而引发免疫反应。对T细胞识别受体文库的表征分析有助于深入了解免疫系统的特征和病因。<br>　　这项研究描述了使用噬菌体展示技术以α-β异源二聚体形式生成人天然T细胞受体文库的过程。天然文库可用于产生针对多种靶抗原的T细胞受体，包括识别肿瘤相关抗原的受体。<br>　　天然文库由健康献血者的外周血单核细胞构建而成。从外周血中提取的总核糖核酸反转录为互补的脱氧核糖核酸，将该脱氧核糖核酸作为模板，使用简并寡核苷酸扩增所有不同的TCRα和β链。<br>　　为了提高亲和力，表达和性能，我们对文库进行了半胱氨酸修饰，通过聚合酶链反应进行点氨基酸诱变在T细胞受体α和β恒定区的恒定链中掺入链间半胱氨酸-半胱氨酸二硫键。<br>　　使用三步克隆法来生成文库以用于随后噬菌体展示进行筛选。将TCRα和β链从过滤载体中克隆到含有非琥珀色抑制物的SS320感受态细胞中，滤出框外和包含α和β链的终止密码子，以获得单独的α和β的T细胞受体文库。使用TG1感受态细胞，将α和βT细胞受体文库连续亚克隆到噬菌体中以获得αβT细胞受体异二聚体库。然后在这些文库中筛选出能够识别肿瘤相关抗原的T细胞识别受体，在对随机挑选的克隆进行噬菌体单克隆酶联免疫吸附测定后，将吸光度读数标准化即可鉴定出阳性结合克隆。<br>　　我们已经构建了五个天然的噬菌体展示的αβT细胞受体异二聚体文库，每个文库超过1000万个克隆。我们的文库达到了80％以上的多样性和70％以上的有效率克隆，这满足了构建高质量文库的质量要求。针对所选抗原进行噬菌体文库筛选，筛选后ELISA检测在OD450nm处吸光度，吸光值范围在0.2至1.8为阳性克隆。经过测序发现阳性结合物的CDR3区展示出足够的随机性，这对于筛选到高质量T细胞识别受体至关重要。<br>　　我们的文库显示出复杂的性质，在文库中T细胞识别受体被重新排列以结合抗原。针对靶抗原的T细胞受体分化集群处基因使用的性质和作用以及变异对于T细胞工程至关重要。还值得注意的是，这项研究中鉴定的T细胞受体克隆可能有助于肿瘤免疫治疗的生物医学应用。<br>　　进一步的研究是分离不与另一种非特异性抗原结合的T细胞受体。分离的抗原特异性TCR克隆可以进一步研究，以评估其作为适用的生物医学候选药物的功效，以及评估我们半胱氨酸修饰的TCR的抗肿瘤功效。