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摘要囊型包虫病(Cystic Echinococcosis，CE)是一种全球广泛传播的人畜共患寄生虫病。在许多经济欠发达的牧区，CE在人群中的患病率和发病率居高不下。例如，在我国的西藏、新疆等地，CE感染就十分严重。目前CE的临床检测，大都依赖于影像学技术;而这项检验适合于CE感染的晚期患者，却无法对早中期的CE感染做出准确判断。由于CE患者体内能产生对抗包虫抗原的抗体，故血清抗体的检测成为CE血清学检测的主要手段。特别重要的是，包虫抗原在血清学检测中的敏感性和特异性能够促进CE的早中期感染的筛查和诊断。所以，寻找高免疫原性的包虫蛋白质一直是CE血清学检测研究的重点。过去几十年来，尽管包虫抗原多有研究，少数天然包虫抗原也能基本应用于临床实践，但是，天然包虫抗原的敏感性和特异性不足仍长期困扰着CE的临床血清学检测。本研究提出一种寻找高免疫原性包虫抗原的研究思路，试图将蛋白质组分析和免疫检测技术相结合，以发掘更多的适用于临床检测的新型包虫抗原。<br>　　本研究大致分为四个阶段:首先，收集若干例CE患者的外科切除的包虫囊样本，将其解剖为四个组分，原头蚴、囊液、生发层和层压层。用鸟枪法蛋白质组技术大致判断哪个包虫囊解剖组分富含包虫蛋白质。其次，提取富含包虫蛋白质的组分中的蛋白质，并采用SDS-PAGE分离蛋白质和Western Blot识别具有免疫原性的包虫蛋白质（以CE患者血清为抗体）;将高免疫反应的区带切胶分离，进一步利用质谱法鉴定区带中的蛋白质成分。再次，在统计分析的基础上，确定高免疫原性的候选包虫蛋白质;用分子克隆法表达重组的包虫蛋白质，以其为抗原和CE患者血清为抗体，采用Western Blot法筛选具有高免疫活性的重组蛋白质。最后，收集上百例CE患者血清，并以高免疫活性重组蛋白质为抗原，运用ELISA法规模化地验证新型包虫抗原的检测敏感性和特异性。<br>　　本研究一共收集了16例CE患者的包虫囊。第一批收集的6例CE患者的包虫囊，被解剖为四个组分并提取其组分的蛋白质。鸟枪法蛋白质组分析表明，在这四个组分中各组分鉴定到的包虫蛋白质为，256个在原头蚴、315个在囊液、203个在生发层、168个在层压层。其中活性时期包虫囊的原头蚴和囊液中不仅含有较多的包虫蛋白质，而且这些蛋白质基本囊括了90％其他包虫囊组分所鉴定的蛋白质。第二批10例包虫囊同样证明活性时期包虫囊的原头蚴和囊液组分更富含包虫蛋白质。因此，7个活性时期包虫囊的原头蚴和囊液组分被作为寻找高免疫原性包虫蛋白质的分析材料。在SDS-PAGE分离包虫蛋白质的基础上，利用7个活性包虫囊的患者血清为抗体进行Western Blot，发现不同的血清均在10个电泳区域中呈现阳性反应(分子量分布在10-95kDa)。将阳性区域的凝胶切下，并辅以胶内胰蛋白酶消化和质谱检测，在所有的胶条中共鉴定了901种包虫蛋白质，但是，只有大约10％为特定条件下共享蛋白质，即大部分CE患者血清均检测到的包虫蛋白质;而且这些共享包虫蛋白质的丰度明显偏高。随后对93种共鉴定的包虫蛋白质进行了B细胞抗原表位的预测分析，从中筛选了41个具有高免疫原性判定分数的包虫基因;再从分子克隆的技术角度考虑，首先在大肠杆菌表达系统中表达了25个重组包虫蛋白质。以临床确认的CE患者血清为抗体，使用Western Blot测试这些重组包虫蛋白质是否具有免疫活性和普适性。测试表明，8种包虫重组蛋白质在大部分CE患者血清中均呈现较强的免疫反应，它们分别为，Cystatin、HSPG、MG2-1、MG2-2、Uncharacterized protein、VAT1L、PSAP-3、SPON1-1。为了确证这些新型包虫抗原的免疫活性，本研究收集了607例经B超验证的CE血清和632例正常人血清，并运用ELISA法同时分析了商品抗原和其中四种新型抗原的检测敏感性和特异性。结果显示，Cystatin、HSPG、MG2-1、MG2-2的检测敏感性分别为93％、90％、96％、96％;其检测特异性分别为98％、98％、97％、94％;而商品化抗原的检测敏感性和特异性为86％和96％。当任意两种新抗原组合时，6种双抗原组合的敏感性范围为96％-98％，特异性范围为97％-99％，均优于商品化抗原。<br>　　本研究以临床CE的包虫囊样本为出发点，整合蛋白质组和免疫检测的技术特点，利用CE患者血清筛选具有高免疫原性的包虫蛋白质，规模化地验证新型包虫抗原的活性。结果提示，通过这个研究策略能够筛选出4种新型包虫抗原，当它们任意两个抗原组合时，检测敏感性和特异性较商品化抗原有明显提升。这些新型抗原组合有望应用于临床检验。