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摘要TNFα作为肿瘤坏死因子(TNF)超家族的成员，是一种多功能炎症因子。具有调节细胞凋亡，增殖与分化等多种生物学功能，参与机体的免疫应答和炎症反应。TNFα表达的异常与许多疾病如败血症、糖尿病、癌症、类风湿性关节炎和炎症性肠病等的发生发展有着密切的关联。当TNFα与其受体结合，能够激活下游多条信号通路。而具体激活哪一条信号通路，是由多种信号分子的相互作用甚至是不同信号通路之间的交互来决定的。TNFα与其受体结合，会使受体的胞质面形成一个由多种信号蛋白共同组成的复合体。然后由不同的复合体展开下游多条信号通路的激活或者是抑制。在过去的几十年里，该信号通路中的许多新的组成成分以及调节机制不断地被发现和理解。但是依然有许多问题没有得到回答，尤其是对于信号网络的时空调控的理解还远远不够。实验室利用免疫沉淀实验和质谱分析相结合的方式，筛选出了一些新型的潜在的TNFα信号通路的调节蛋白。本篇论文的工作主要集中在探索两个蛋白RCHY1(ring finger and CHY zinc finger domain containing1)和SARNP(SAP domain containing ribonucleoprotein)在调控TNFα信号通路中的作用以及相应的生理病理功能。<br>　　RCHY1是一个含有ring finger结构域的泛素连接酶(E3)，在泛素激活蛋白(E1)和泛素结合蛋白(E2)的协同下，能够催化底物发生K48位泛素链修饰并导致目标蛋白被蛋白酶体水解。已有的报道显示RCHY1具有调控细胞的增殖与分化，DNA的损伤修复等多种生物学功能。但目前还鲜有报道RCHY1在炎症相关信号通路领域中的作用。而本论文的工作表明RCHY1在NF-κB信号通路以及肠炎的发生发展中发挥着重要的调控作用。发现在TNFα信号通路中，RCHY1蛋白能够通过抑制RIP1的泛素化修饰，进而起到抑制NF-κB激活的作用。同时缺失RCHY1能够显著增强细胞内TRADD蛋白的含量。此外缺失RCHY1能够促进由LPS，IL-1β以及poly(I∶C)诱导的NF-κB的激活。进一步的机制研究提示RCHY1通过其自身的CTCHY结构域结合TRAF6，并阻止TRAF6发生K63位的泛素化修饰，从而抑制下游NF-κB的激活。有意思的是，发现脂多糖(LPS)的刺激能够导致细胞下调RCHY1mRNA的表达，降低细胞内RCHY1的蛋白含量。由于LPS存在于革兰氏阴性菌的细胞外膜上，根据以上的实验结果，可以推测，当机体受到外来病原体的入侵，天然免疫细胞能够快速的识别病原菌表面的LPS，下调RCHY1的表达水平，通过上述多种分子机制，促进NF-κB的激活，加速相关炎症因子的表达，从而快速的清除病原菌。为了研究RCHY1对炎症反应和炎症性肠病的调控作用，利用基因重组的方式获得了Rchy1全身敲除小鼠，并用DSS构建小鼠的急性肠炎模型。发现在疾病的发生发展阶段，野生型小鼠和基因敲除型小鼠的临床打分没有统计学意义上的差别。但在疾病的恢复阶段，野生型小鼠会逐渐康复，但是Rchy1基因敲除小鼠的体重会持续下降，呈现显著升高的死亡率。进一步通过HE染色小鼠的结肠组织切片，发现在疾病的恢复阶段，Rchy1基因敲除小鼠的结肠组织加重的炎症反应，表现为更严重的免疫细胞浸润，杯状细胞的消失，溃疡加重，隐窝脓肿和消失。综上所述本论文证实，RCHY1能够抑制多中信号蛋白参与的NF-κB的激活，并且在DSS诱导的小鼠肠炎的恢复阶段发挥着重要的保护作用。<br>　　SARNP是一个含有SAP结构域的核糖核蛋白，由Louis M.Pelus等在2002年首先发现并克隆。已有报道表明，SARNP是mRNA出核转运复合体中一个重要的组成成分，在mRNA的剪切以及出核转运中发挥着重要的调节作用。有研究表明，SARNP的表达水平受多种细胞因子的调控，比如促红细胞生成素、血小板生成素等，并且在多种肿瘤细胞中，SARNP呈现异常的表达。我们的工作发现SARNP是TNFα信号通路中一个重要的调控因子。用相应的shRNA降低SARNP的表达能够有效增强TNFα诱导的JNK的激活，但对TNFα诱导的ERK，p38以及NF-κB的激活没有影响。同时SARNP对由IL-1β诱导的JNK的激活也没有明显的影响。因此推断SARNP很可能特异性调控TNFα信号通路，抑制TNFα诱导的JNK的激活。另外，还发现当抑制NF-κB的激活之后，缺失SARNP能够有效抑制TNFα诱导的细胞凋亡和caspase8的激活。这提示SARNP可能对TNFR1complexⅡ的组装发挥调节作用。SARNP参与的信号转导及其在TNFα相关疾病中的功能有待进一步阐明。