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摘要全球癌症负担依旧逐年上升，结肠癌已经成为致死率排名第三的癌症。结肠癌彻底根除的难点就在于传统方式（化疗，放疗，手术切除等方式）治疗后出现化疗药物耐药性和术后肿瘤转移复发，预后不良的状况。<br>　　孤儿核受体Nur77广泛地参与到肿瘤的发生发展中，虽目前并未发现内源性配体，但是其生物学活性可受到小分子化合物的调控，作为一个良好药物靶点备受关注。<br>　　本课题涉及的化合物7-5是根据Nur77蛋白结构设计筛选得到，旨在靶向Nur77从而影响Nur77所介导的信号通路以达到特异性诱导恶性肿瘤细胞凋亡的作用。经过Biacore实验发现7-5与Nur77蛋白结合常数Kd为46.9nM。通过体内点击化学实验发现化合物7-5体内结合Nur77特征，提示化合物7-5是Nur77优良的新配体。7-5诱导肿瘤细胞死亡，杀伤效果显著，IC50值为1.153μM，但7-5诱导后未出现明显PARP蛋白切割带，提示7-5诱导的死亡方式是非凋亡依赖途径。实验中发现7-5时间依赖性的诱导细胞内产生空泡并观察到时间依赖性产生的空泡在细胞质内累积融合变大，进而引起细胞质极度空泡化，最终导致细胞脱离底层，破裂，死亡。后经电镜下观察细胞形态学，免疫荧光试验及流式细胞术实验鉴定该死亡方式为methuosis。作为一种新的死亡方式，methuosis本质可以概括为巨胞饮作用的功能紊乱，区别于凋亡，这种死亡方式无DNA损伤，非Caspase依赖，所以不会被广谱蛋白酶抑制剂所抑制。<br>　　后续免疫荧光实验证实7-5会诱导Nur77定位到溶酶体，引起细胞内晚期内体与溶酶体融合功能障碍，细胞因此发生methuosis。且7-5诱导methuosis呈现Nur77依赖性。最后在Ras突变情况不同的结肠癌细胞系中观察到了明显的methuosis产生差异性，7-5只特异性诱导Ras突变的结肠癌细胞系发生methuosis，正常结直肠纤维细胞和Ras不突变的结肠癌细胞无影响。这一点也在小鼠移植瘤实验中得到验证，7-5对于HCT-116（Ras突变）移植瘤具有较强杀伤作用，而对HT-29移植瘤（Ras不突变）几乎无效果。<br>　　本实验研究发现新的Nur77配体化合物7-5，在Ras突变肿瘤细胞中，其通过结合Nur77，改变Nur77亚细胞定位至溶酶体，阻滞内体的消除，诱导methuosis的发生。研究扩充了Nur77非基因型功能，为临床上治疗产生耐药性的肿瘤细胞提供了非凋亡依赖死亡方式-methuosis新的可行性，为靶向Nur77来治疗ras基因突变的恶性肿瘤提供新思路，也证明了化合物7-5的研究价值。