摘要RNAG-四链体(RNAG-quadruplex,RG4)是由富含串联重复鸟嘌呤的RNA折叠形成的高级结构。RG4在许多细胞功能中起着至关重要的作用。该结构功能的实现往往是通过自身结构变化及一些外界刺激因素(如解旋酶)的调节。本研究论文在单分子水平上探究了RG4结构稳定性及RNA解旋酶MOV10对该结构的动态调节机制。<br> 本论文以端粒酶RNA的部分序列为研究对象,使用核磁共振(NuclearMagneticResonance,NMR),单分子荧光共振能量转移(Single-moleculeFluorescenceResonanceEnergyTransfer,smFRET),核酸酶消化,圆二色谱(CircularDichroism,CD)和单分子光镊(OpticalTweezers,OT)等多种实验方法研究了RG4临近单链RNA(single-strandedRNA,ssRNA)对其结构稳定性的影响。实验发现,临近ssRNA会显著降低RG4结构的稳定性,在不同的离子浓度下产生四种RG4的构象异构体,这些异构体能够快速地动态转换。进一步研究发现对RG4结构稳定性的影响需要至少含有6个核苷酸的临近ssRNA。此外,该效应与ssRNA在序列中的极性、序列以及位置无关。<br> 该论文进一步在单分子水平上研究RNA解旋酶MOV10调节稳定RG4结构的动态分子机制。实验发现MOV10对RG4的解旋具有特异性,MOV10需RG4近邻的5''ssRNA来稳定结合RG4结构并对其行使解旋功能。在解旋过程中,有明显的三个阶梯现象出现,表明RG4在解折叠过程中存在三个中间态。<br> 综上,本论文通过单分子技术结合传统生化实验,揭示了临近ssRNA对RG4稳定性的影响,为RG4的结构学和折叠动力学提供了新见解。同时,明确了MOV10解旋酶解旋RG4的分子机制,解释了其结合和解旋的机理特征。这些发现对RG4解旋酶这一重要领域进行补充,为探究新型解旋酶的解旋模式提供借鉴。这两方面的研究为RG4在体内的功能研究提供了理论基础。
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