检索历史 清除

摘要背景与目的:<br>　　膀胱癌是全球发病率排名第十的泌尿系统恶性上皮肿瘤，其发病率存在性别差异，在男性肿瘤患者中排名第七，在女性肿瘤患者中排名第十七。膀胱癌的发生发展离不开原癌基因的激活和抑癌基因的失活，这些基因的改变导致膀胱癌细胞异常增殖，并侵袭到身体的其它部位。近年来，随着对膀胱癌的研究不断加深，人们对膀胱癌的认识不断提高，治疗手段也在进步。但是，膀胱癌治疗后容易复发的问题导致预后不良。因此，研究膀胱癌增殖机制，有重要的基础和临床意义，有利于我们找到新的治疗方法。<br>　　研究表明，核内不均一核糖核蛋白F(HeterogeneousnuclearribonucleoproteinF,hnRNP-F)在多种恶性肿瘤中表达升高，起到促进肿瘤进展的作用。在前面的研究中，我们证实，在人膀胱癌组织中，hnRNP-F的mRNA水平和蛋白水平都表达升高，且与患者预后不良相关;体内外实验证明hnRNP-F可促进膀胱癌细胞的侵袭能力、迁移能力以及EMT过程。<br>　　本研究课题以前期研究为基础，拟探讨hnRNP-F蛋白对人膀胱癌细胞增殖能力的影响，并探究调控hnRNP-F表达的分子机制。<br>　　第一章:HnRNP-F促进膀胱癌细胞增殖<br>　　研究方法:构建稳定干扰hnRNP-F的膀胱癌细胞株，采用CCK8增殖实验、平板克隆实验检测hnRNP-F对膀胱癌细胞增殖能力的影响，采用流式细胞术检测hnRNP-F对膀胱癌细胞周期分布的影响。<br>　　结果:HnRNP-F能促进膀胱癌细胞的增殖;hnRNP-F能促进膀胱癌细胞周期G1/S期转换，加快细胞周期进程。<br>　　第二章:生物信息学预测hnRNP-F与PI3K/AKT相关<br>　　研究方法:从TCGA数据库下载403例膀胱癌患者的资料，并用生物信息学方法富集分析与hnRNP-F相关的基因和信号通路。采用药物半数致死量实验确定PI3K/AKT通路抑制剂LY294002在膀胱癌细胞中的最佳剂量，用蛋白质印迹方法检测膀胱癌细胞中hnRNP-F与PI3K/AKT通路蛋白的表达关系，确定LY294002在膀胱癌细胞中的作用效果。<br>　　结果:HnRNP-F与PI3K/AKT通路高度相关。HnRNP-F无法影响PI3K/AKT通路蛋白的表达，PI3K/AKT通路蛋白可以促进hnRNP-F表达。<br>　　第三章:PI3K/AKT调控膀胱癌细胞中hnRNP-F表达<br>　　研究方法:用生物信息学法预测出可能作用于hnRNP-F的转录因子。采用染色质免疫沉淀技术实验(ChIP)检测出膀胱癌细胞中FOXO1结合hnRNP-F启动子区域。构建hnRNP-F启动子区域全长质粒，用双荧光素酶报告实验确定FOXO1对hnRNP-F的作用。构建并转染干扰hnRNP-F和FOXO1质粒，采用CCK8增殖实验、平板克隆实验检测使用LY294002后FOXO1对膀胱癌细胞增殖能力的影响，采用流式细胞术检测使用LY294002后FOXO1对膀胱癌细胞周期的影响。<br>　　结果:在膀胱癌细胞中，FOXO1结合在hnRNP-F的启动子上并抑制其转录;在膀胱癌细胞中，PI3K/AKT通过FOXO1调控hnRNP-F蛋白表达从而促进细胞周期进程，促进细胞增殖;干扰FOXO1蛋白表达可以恢复PI3K/AKT抑制剂调控hnRNP-F的抑制膀胱癌细胞周期进程和增殖作用。<br>　　结论:PI3K/AKT通过FOXO1调控hnRNP-F表达促进膀胱癌细胞增殖。