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Neu5Ac通过激活MAPK/ERK信号通路促进人牙髓干细胞成骨/成牙分化的研究

摘要唾液酸(sialicacid,SA)是一种天然存在的单糖,通过α2-3、α2-6和α2-8键与N-、O-糖链或糖脂结合形成细胞膜表面受体。SA主要有两种形式:N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)和N-乙醇基神经氨酸(Neu5Gc)。在这些形式中,只有Neu5Ac存在于健康的人体中,其中它作为细胞之间的重要调节因子在信号转导、介导免疫细胞的功能中发挥重要作用。唾液酸与复发性阿弗他溃疡、口腔潜在恶性疾病(oralpotentiallymalignantdisorders,OPMD)、口腔癌等口腔疾病密切相关,且唾液酸在不同口腔疾病中起着不同的作用。OPMD和口腔癌患者血清和唾液中的唾液酸浓度呈现高水平,而复发性口疮和其他口腔炎症患者表现出低浓度的唾液酸。牙髓干细胞(Dentalpulpstemcell,DPSC)通过成牙本质向分化来促进牙本质-牙髓复合体的修复。DPSC作为一种间充质干细胞,在临床治疗方面具有广阔的应用前景,但唾液酸在DPSC成骨/成牙本质向分化发生过程中有何影响尚不清楚。因此,我们拟探究Neu5Ac对DPSC成骨/成牙本质向分化的影响。<br>  我们从人第三恒牙中分离出DPSCs,进行了体外培养并在荧光显微镜下检测到DPSC膜上唾液酸的存在。经过不同浓度的Neu5Ac或唾液酸苷酶的处理(能特异性从细胞表面去除唾液酸)后,通过矿化能力、碱性磷酸酶实验和体内实验来评估DPSC的成骨/成牙本质向分化能力。研究结果表明,Neu5Ac(0.1mM或1mM)处理DPSC可显著提高其矿化能力和碱性磷酸酶活性,其目的蛋白:骨唾液蛋白(bonesialoprotein,BSP)、人牙本质基质蛋白1(humandentinmatrixprotein1,DMP1)、牙本质涎磷蛋白(Dentinesialophosphoprotein,DSPP)的表达水平也呈现出显著升高。用ManNAc(Neu5Ac的前体形式)灌胃裸鼠后也能增强体内DPSC矿化结节的数量。此外,在Neu5Ac存在或者缺失的情况下,我们又分析了成骨/成牙本质向分化相关蛋白的表达及MAPK信号通路的活化情况。结果表明,Neu5Ac通过激活ERK信号通路促进DPSC的分化。阻断ERK通路的活化后可降低DPSC的成骨/成牙本质向分化的能力。<br>  综上所述,我们研究发现唾液酸苷酶去除DPSC表面的唾液酸可抑制其成骨/成牙本质向分化,Neu5Ac处理可增强DPSC的成骨/成牙本质向分化。机制研究表明,ERK信号通路的激活是Neu5Ac增强DPSC成牙本质向分化的关键环节。研究结果为充分认识Neu5Ac影响DPSC成骨/成牙本质向分化提供了实验依据,并为临床牙齿疾病的治疗提供新的见解和理论依据。

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