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摘要创伤性脑损伤（TraumaticBrainInjury,TBI）是指外力作用于头部造成脑组织器质性损伤，常导致严重的致死率和致残率，且增高TBI后长期认知功能障碍的风险。其中兴奋性神经毒性在脑外伤后继发性脑损伤中占据着重要的地位，而研究显示NR2B受体的过度持续激活将介导钙离子大量内流，引发兴奋性毒性，是诱导兴奋性毒性的关键受体。因此，NR2B受体是脑外伤后兴奋性毒性重要的药物靶点，抑制NR2B受体的持续激活可有效地干预继发性脑损伤，从而起到神经保护作用。<br>　　本研究试图借助较为成熟的虚拟筛选技术，针对NR2B受体筛选中药单体数据库，筛选出抑制NR2B受体表达的候选中药单体，以期减弱脑外伤后继发性脑损伤，从而改善认知功能障碍。接着，对筛选所得到的候选中药单体进行体外实验，评估其干预效果。为了进一步验证候选中药单体的神经保护效果，本研究在课题组的前期研究工作基础上研制了一种新型TBI小鼠装置，再根据构建的TBI小鼠模型评估以上候选中药单体的神经保护效果。<br>　　在本研究的药物筛选过程中，首先选择了22种具有抗炎、抗氧化较强的中药，下载其化合物分子结构，构建了3157种中药单体小分子数据库。再利用基于受体的分子对接和基于配体的药效团模型进行联合筛选，经过一系列筛选和处理后得到了21种候选中药单体。然后再利用谷氨酸致PC12细胞损伤用于模拟过量谷氨酸致神经细胞兴奋性神经毒性模型，进一步评估所筛选的候选中药单体对体外模型的神经保护效果。结果显示选取的候选中药单体姜黄素及连翘苷均能够显著提高谷氨酸致PC12细胞后的存活率，降低其凋亡率，减少细胞内钙离子含量。因此。体外实验表明姜黄素及连翘苷均具有较好的保护效果。为了进一步评估候选中药单体的神经保护效果，则需构建TBI动物模型并验证其干预效果。<br>　　在本课题组的前期研究基础上，研制了一种基于压缩气体的新型TBI装置，该装置具备体积小、操作简单、重复性好、建模效率高等优点，可以快速、高效地构建TBI小鼠模型。另外，本研究设计了三种凹深分别为0.7mm、0.6mm、0.5mm的铝片，它们的破片阈值大小及所产生的冲击波大小均具有显著性差异;并且其所造成的死亡率分别为3.33％、17.14％和32.50％，与文献报道的不同TBI严重程度所造成的死亡率相符合。再结合脑外伤后病理组织变化、凋亡相关蛋白表达以及行为学评估，可将本研究中三种不同规格铝片所构建的小鼠TBI模型看作为三种不同程度TBI模型，为今后TBI损伤机理研究及药物干预效果评估提供新的工具。<br>　　结合体外实验及动物模型的结果，选取了候选中药单体姜黄素对TBI动物模型进行干预效果评估。结果显示姜黄素能够显著降低TBI后脑水肿程度，减弱血脑通透性被破坏程度，减少神经细胞内线粒体的损伤，降低脑组织中神经细胞凋亡比率，并且显著改善了TBI后小鼠的认知和运动功能，具有明显的神经保护作用。此外，本研究的候选中药单体姜黄素是根据NR2B受体虚拟筛选所得的，因此，本研究检测了NR2B受体及其下游分子的表达，发现姜黄素能够显著减少NR2B受体及其下游分子PSD-95和nNOS的表达，而对NR2A受体的表达无明显影响，说明姜黄素可选择性地抑制NR2B受体的表达，减弱其诱导的兴奋性神经毒性，从而起到神经保护效果。另外，姜黄素也能够显著降低脑外伤后炎症因子的水平及氧化应激的含量，从而减少对脑组织神经细胞的损伤，起到神经保护效果。表明姜黄素能够抑制兴奋性毒性、降低炎症反应及氧化应激等继发性脑损伤通路，为今后脑外伤治疗提供了潜在的候选药物。<br>　　综上所述，在本研究中，一方面利用虚拟筛选技术寻找治疗TBI的有效中药单体分子，为今后TBI的治疗提供潜在的候选中药单体分子;另一方面构建了一个体积小、操作简单、建模效率高且模拟不同程度脑损伤的新型TBI装置，为今后TBI动物研究提供一种简单便利的新工具。