换一批
换一批摘要目的:将现代分子生物学技术应用于胎儿宫内发育迟缓(IUGR)的病理机制的研究,筛选出IUGR胎鼠肝细胞差异表达基因,并确定差异表达基因与IUGR发生和演变有关系,探讨IUGR的分子机制,为基因治疗IUGR奠定理论基础.方法:采用目前研究疾病相关基因的最佳方法mRNA的差异显示(mRNA differential display DD),运用先进的差异显示系统(genomy XLRS),通过合理的引物设计,优化的系统配置,经凝胶电泳及荧光扫描仪精确地定位差异片段,并测得其序列.其主要步骤:(1)通过孕鼠腹腔内注射更生霉素选出IUGR胎鼠.(2)抽提正常的IUGR胎鼠肝细胞的总RNA.(3)相同条件下两组RNA分别做反转差异显示PCR(DDRT-PCR).(4)PCR产物在凝胶下电泳寻长差异cDNA条带.(5)重扩增出差异条带中的cDNA并电泳.(6)将符合要求的cNDA条带筛出.(7)测定差异条带cDNA序列.结论:IUGR胎鼠肝细胞中可能有某些基因表达受限或上调,影响IUGR的发病和演变,这些基因很可以与肝细胞能量代谢的某些因子或相关调控因子表达有关.
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