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摘要白色念珠菌是外阴阴道假丝酵母菌病(VulvovaginalCandidiasis，VVC)最常见的致病菌，由于抗真菌药物在临床治疗中的不合理使用，真菌耐药性不断增强，常用的抗真菌药物已不能达到治疗真菌感染的效果，研究新型抗真菌药物和治疗方法是解决这一问题的重要途径。近年来临床对于VVC治疗，从单一性局部给药逐渐倾向于联合用药。壳聚糖(Chitosan)是一种天然聚合物，具有广谱抗菌活性与不产生耐药性的特性。在实际应用中，壳聚糖由于其低溶解度，活性应用受到限制。本文以壳寡糖(Chitoo1igosaccharides，COS)与壳聚糖季铵盐(HydroxypropyltrimethylAmmoniumChlorideChitosan，HACC)为研究对象，联合制霉菌素(Nystatin，NY)，对白色念珠菌进行抗菌活性与机制的研究，得到不致耐药性、长效、快速抗白色念珠菌的联合用药组合，为临床应用提供依据。主要研究结果如下:<br>　　(1)壳寡糖的制备表征与无抗白色念珠菌活性原因分析。通过乙醇沉淀与透析制备样品，色谱分析COS1、COS2的主要成分为壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖，壳四糖在COS2中比重较大。通过微量肉汤稀释法，COS在最高浓度256mg/mL下无抗白色念珠菌活性。COS作用后改变白色念珠菌表型，增加对皮肤的感染。<br>　　(2)HACC/NY对白色念珠菌抗菌活性与抑制毒力因子的研究。以壳聚糖季铵盐作为研究对象，通过质构仪测定黏度与浓度的关系，以浓度为4mg/ml作为后续实验的初始浓度;傅里叶变换红外光谱测定，表明两种药物联合具有稳定性;通过微量肉汤稀释法，测定HACC与NY的最小抑菌浓度(MIC)分别为0.25mg/mL与1μg/mL生长动力学曲线中，当浓度为2MIC时HACC联合NY能够产生长效、快速的抗菌效果。通过结晶紫染色法，平板试验，在2MIC时，HACC联合NY较单独应用，对不同毒力因子均有极显著的抑制效果;在HACC单独与联合作用后，破坏细胞壁膜，导致胞内可溶性蛋白的泄露。<br>　　(3)HACC/NY对白色念珠菌抗荫机制的研究。扫描电镜观察到HACC吸附于菌体，与正常细胞相比壁膜凹陷明显;通过激光共聚焦显微镜的观察检测，表明药物作用后诱导细胞发生凋亡;应用荧光探针DCFH-DA测定胞内ROS变化，HACC作用后能够大量增加胞内ROS，从而诱导细胞凋亡。抗菌分子机制研究中，HACC与NY共同作用时，具有更稳定更强效的下调毒力因子相关基因的作用。联合用药时能够对DNA、RNA造成损伤，下调毒力因子相关基因，以达到长效的抗菌作用，为临床应用提供相关依据。