拟南芥茉莉酸酯信号通路中WRKY51和JAV1蛋白的表达纯化及相互作用研究-论文-万方医学网

拟南芥茉莉酸酯信号通路中WRKY51和JAV1蛋白的表达纯化及相互作用研究

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摘要在适应环境变化的过程中，植物进化出高度复杂的防御系统来抵御环境胁迫和生物灾害。WRKY蛋白家族是植物中最大的转录调控因子超家族之一，参与众多植物防御信号通路的调控。WRKY蛋白通过高度保守的WRKY domain与特定的DNA序列TTGAC(C/T)相结合。部分WRKY蛋白能够与VQ蛋白家族成员相互作用，VQ蛋白通过改变自身磷酸化状态激活或抑制WRKY蛋白，进而调节下游基因的转录表达，影响植物相关激素的合成。本文主要对WRKY51蛋白与VQ家族蛋白JAV1的相互作用以及WRKY51蛋白结合核酸的能力进行研究。<br>　　本文以拟南芥cDNA文库为模板，通过PCR技术扩增WRKY51和JAV1基因，经限制性核酸内切酶酶切、连接等分子克隆技术将目的基因构建在相应载体，在大肠杆菌细胞进行蛋白表达。我们根据序列比对结果设计了WRKY51的WRKY domain以及JAVl(1-85)克隆，通过亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等纯化技术获得了纯度较高、性质稳定的蛋白样品。Pull Down实验表明，WRKY51与JAV1蛋白间存在相互作用;凝胶迁移实验(EMSA)表明WRKY51WRKY domain具备和W box DNA结合的能力。我们同时制备了WRKY51和W box DNA的复合物，进行蛋白结晶实验，初步获得了WRKY51(95-170)-DNA复合物晶体。