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摘要目的:通过电刺激(electricalstimulation，ES)上矢状窦区硬脑膜建立偏头痛大鼠模型;研究T-型钙通道(T-typecalciumchannels)Cav3.2在偏头痛大鼠三叉神经节(trigeminalganglion，TG)中的表达及功能变化;明确血清反应因子(serumresponsefactor，SRF)通过调控Cav3.2的表达及功能参与偏头痛调节。<br>　　方法:<br>　　(1)建立偏头痛模型大鼠，用vonFrey纤维丝和降钙素基因相关肽酶联免疫吸附实验，分别检测假手术组(sham组)和电刺激组(ES组)大鼠眶周痛阈值以及颈外静脉血浆中降钙素基因相关肽(calcironingenerelatedpeptide，CGRP)含量的变化。<br>　　(2)应用免疫荧光染色技术，检测大鼠TG中Cav3.2和转录因子SRF的表达分布。<br>　　(3)应用实时荧光定量PCR技术和蛋白免疫印迹技术，研究sham组和ES组大鼠TG中Cav3.2和转录因子SRF表达变化。<br>　　(4)利用电生理技术，记录sham组和ES组大鼠TG中T-型钙通道电流。<br>　　(5)通过分子克隆、双荧光素酶报告基因技术和生物信息软件PROMO，筛选CACNAlH基因核心启动子区，预测与CACNAlH基因核心启动子区结合的转录因子。<br>　　(6)通过逆转录PCR技术、实时荧光定量PCR技术和双荧光素酶报告基因技术，筛选调控CACNAlH基因表达的转录因子。<br>　　(7)利用染色质免疫共沉淀技术，检测SRF与CACNAlH基因启动子区结合情况。<br>　　(8)通过在体定位三叉神经节并注射化学修饰的Cav3.2siRNA和SRFsiRNA，检测对ES大鼠痛觉阈值以及SRF与Cav3.2的表达变化。<br>　　结果:<br>　　(1)ES组大鼠在电刺激第2天，眶周机械痛阈值显著下降，电刺激第7天痛阈值最低，停止电刺激后持续3天出现痛觉过敏;ES组大鼠颈外静脉血浆内CGRP浓度相较于sham组大鼠显著升高。<br>　　(2)ES大鼠TG中Cav3.2mRNA和蛋白水平表达显著升高，IB4-神经元T-型钙通道电流密度明显增大。<br>　　(3)Cav3.2在大鼠TG中主要表达在与降钙素基因相关肽(CGRP)和植物凝集素(IB4)标记的中小直径神经元。<br>　　(4)下调Cav3.2的表达，可以显著缓解ES大鼠的机械性痛觉过敏，明显降低T-型钙通道电流密度。<br>　　(5)转录因子SRF通过特定位点与CACNAlH基因核心启动子区结合。<br>　　(6)转录因子SRF在ES大鼠TG中表达显著升高，且与Cav3.2存在大量共标。<br>　　(7)在ES大鼠TG中转录因子SRF与CACNAlH基因启动子区的结合程度明显增加。<br>　　(8)下调ES大鼠TG中转录因子SRF的表达，引起Cav3.2表达显著降低，大鼠痛阈值显著回升。<br>　　结论:<br>　　(1)T-型钙通道Cav3.2在电刺激上矢状窦区硬脑膜建立的偏头痛大鼠TG中表达和功能上调并参与疼痛调控。<br>　　(2)转录因子SRF在ES大鼠TG中表达显著升高，并通过特异性识别位点与CACNAlH基因核心启动子区结合。<br>　　(3)ES大鼠TG中，转录因子SRF与CACNAlH基因启动子区结合增加，促进Cav3.2的表达，引发痛觉过敏。