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摘要EBV作为线性双链DNA病毒，其基因组和复制中间体会被宿主当作DNA双链断裂信号而促发DNA损伤应答和细胞凋亡。同时，病毒DNA的复制需要利用DNA损伤应答上游蛋白如ATM、MRN复合物。因此EBV被认为有意的诱导DNA损伤应答的某些方面以支持病毒的传播。但为了维持细胞存活和病毒感染，EBV会同时利用自身蛋白来调控DNA损伤应答中的关键角色使DNA损伤应答信号失活。研究表明，EBV间质蛋白BKRF4可以通过其N端酸性区域结合宿主组蛋白，同时影响RNF168及53BP1的招募，进而影响宿主的DNA损伤应答信号传递。但BKRF4如何特异性识别组蛋白并影响DNA损伤应答信号传递的分子机制并不清楚。<br>　　本文利用X射线晶体学以及核磁共振的方法解析了BKRF4与H2A-H2B复合物的完整结构。BKRF4采用“threeanchors”模型结合H2A-H2B，分别通过其65-69位氨基酸EEEYP、80-86位氨基酸形成的DWP基序以及90-94位氨基酸DESDY三段锚定在H2A-H2B的H2Aα1、H2B的α1-L1-α2、以及H2Aα3-αC三个区域，缠绕组蛋白H2A-H2B的大部分表面，形成高度稳定的复合物。BKRF4通过80-86位氨基酸形成DWP基序稳定的结合在H2B的疏水口袋，其中84位色氨酸插入到由H2B的N端形成的疏水口袋中。ITC及pull-down实验表明DWP基序相对于组蛋白伴侣保守的DEF/Y基序，对H2B的疏水口袋有更强的结合。<br>　　复合物结构显示，BKRF4与H2A-H2B的结合占据了核小体中H2A-H2B和DNA的结合界面。EMSA结果表明BKRF4可以与DNA竞争结合组蛋白，并把DNA从与组蛋白H2A-H2B的非特异聚集中解离出来，这暗示我们BKRF4可能通过与DNA竞争结合组蛋白H2A-H2B而影响核小体的组装。核小体稳定性实验结果显示BKRF4的加入可以加速核小体的解离，然而其介导相互作用的关键氨基酸突变后会失去该功能。实验显示，BKRF4并不能结合常规核小体，但可以结合到局部展开的松散核小体上，而RNF168却不能结合这种松散的核小体。这表明，BKRF4结合展开的松散核小体，并维持核小体的松散状态或可使其进一步解离，从而导致RNF168不能结合。同样，激光微辐射诱导DNA损伤实验结果显示BKRF4可以迅速定位到激光诱导的DNA损伤位点，通过突变BKRF4破坏其与H2A-H2B的结合，可以破坏BKRF4向DNA损伤位点的募集。同时，细胞内过表达BKRF4，会在诱导DNA损伤时显著抑制53BP1招募，而过表达BKRF4突变体则不影响53BP1的招募。上述结果表明BKRF4与H2A-H2B的结合在BKRF4定位到DNA损伤位点中发挥重要功能。<br>　　我们的实验结果首次揭示了BKRF4结合H2A-H2B并干扰RNF168招募的分子机制。在DNA发生损伤时，BKRF4通过特异性识别组蛋白H2A-H2B，迅速定位到DNA损伤处，与打开的核小体结合并促进其去组装，从而破坏RNF168等下游因子与染色质的结合，阻断DNA损伤修复信号的传递。这种病毒通过特定蛋白干扰核小体组装来影响下游蛋白招募，进而控制细胞进程的机制，为后续研究病毒的侵染提供了理论依据。