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摘要研究背景:线粒体质量控制对心肌肥厚的发生发展至关重要，研究表明PINK1(PTEN-inducedputativekinase1)参与线粒体质量控制。PINK1在正常线粒体中迅速降解，但在受损的线粒体中积累并启动线粒体自噬降解受损的线粒体，然而，PINK1对AngⅡ诱导的心肌肥厚的影响未得到验证，以及PINK1参与调节的线粒体自噬在心肌肥厚中的最终效应尚不明确。<br>　　目的:在AngⅡ诱导的小鼠心肌肥厚模型和心肌细胞损伤模型中检测PINK1和自噬活性的变化。在心肌细胞损伤模型中调控PINK1，检测其对心肌线粒体结构和功能的影响及其机制。<br>　　方法:动物实验:使用野生型C57BL/6雄性小鼠（8周龄）构建AngⅡ诱导的心肌肥厚模型，通过微量缓释泵灌注AngⅡ(1500ng/kg/min)28天，而假手术组使用相同方式灌注同等体积的生理盐水，分别在建模第0周，第2周，第4周使用小动物高分辨超声仪检测各组小鼠心功能变化;在建模第3天，第5天，第7天，第14天，第28天提取各组心肌组织蛋白进行免疫印迹分析;在建模28天后使用HE染色，Masson染色，天狼猩红染色，TUNEL染色检测心肌组织纤维化及凋亡程度，使用免疫印迹和免疫组织荧光染色检测自噬相关蛋白表达变化。<br>　　细胞实验:提取原代大鼠心肌细胞，给与AngⅡ1（1μM）刺激24小时，构建心肌细胞损伤模型，并通过腺病毒介导PINK1过表达和PINK1敲减，研究PINK1在心肌细胞损伤模型中的作用;检测各组活性氧(ROS)，线粒体膜电位(MMP)，心肌细胞凋亡等损伤性指标;通过透射电子显微镜观察线粒体形态及线粒体自噬;免疫印迹实验检测自噬相关蛋白LC3，Beclin1和SQSTM1的表达;通过共聚焦显微镜观察溶酶体和线粒体的共定位;通过免疫印迹实验检测内源性PINK1,Mito-PINK1,Total-Parkin,Cyto-Parkin,Mito-Parkin和P-Parkin蛋白水平。<br>　　结果:<br>　　1.AngⅡ诱导的小鼠心肌肥厚模型中PINK1及心肌组织的改变:PINK1蛋白水平随AngⅡ刺激时间逐渐升高，在第5天达到最高，随后逐渐下降。小鼠接受AngⅡ灌注28天后，其心肌组织发生纤维化，心肌细胞发生凋亡，自噬相关蛋白表达下降。<br>　　2.AngⅡ诱导的心肌细胞损伤模型中PINK1及细胞功能的改变:PINK1的蛋白水平随AngⅡ刺激时间逐渐升高，在24小时达到最高，随后维持至60小时后逐渐下降。AngⅡ刺激心肌细胞24小时后其MMP降低，ROS水平和细胞凋亡率升高，自噬相关蛋白表达升高。<br>　　3.敲减PINK1对心肌细胞功能的影响，以及对下游基因表达的影响:在AngⅡ诱导的心肌细胞损伤模型中，敲减PINK1后，Parkin转位至线粒体被抑制，相比Si-Control+AngⅡ组，MMP进一步降低，ROS水平和细胞凋亡率进一步升高，自噬相关蛋白表达进一步下降。<br>　　4.过表达PINK1对心肌细胞功能的影响和下游基因表达的影响，以及自噬抑制剂对过表达PINK1效应的影响:在AngⅡ诱导的心肌细胞损伤模型中，PINK1过表达促进了Parkin转位和磷酸化，相比Ad-Control+AngⅡ组，自噬标志物<br>　　上调，ROS水平和细胞凋亡率下降，此外，自噬抑制剂CQ增加ROS水平和细胞凋亡率。<br>　　结论:<br>　　1.在AngⅡ诱导的心肌细胞损伤模型和小鼠心肌肥厚模型中，PINK1表达水平均呈早期阶段升高，中晚期阶段下降。<br>　　2.在AngⅡ持续注射诱导的小鼠心肌肥厚模型晚期阶段，线粒体自噬水平下调，心肌纤维化加重，心肌细胞凋亡增加。<br>　　3.在AngⅡ诱导的心肌细胞损伤模型中，线粒体自噬水平上调，心肌细胞损伤加重。<br>　　4.敲减PINK1可进一步降低AngⅡ诱导的线粒体膜电位下降、升高活性氧水平和细胞凋亡率、加重心肌细胞肥大。<br>　　5.敲减PINK1能够抑制自噬相关蛋白表达，减少线粒体自噬活性。<br>　　6.敲减PINK1抑制Parkin转位和磷酸化。<br>　　7.过表达PINK1能够恢复AngⅡ诱导的线粒体膜电位下降、降低活性氧水平和细胞凋亡率、缓解心肌细胞肥大。<br>　　8.过表达PINK1能够促进自噬相关蛋白表达，上调线粒体自噬活性。<br>　　9.自噬抑制剂CQ减弱过表达PINK1的效应。<br>　　10.过表达PINK1促进Parkin转位和磷酸化。