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摘要目的:分析、对比血清学和分子生物学方法检测临床布病患者血样的效果，对各个方法在检出率、敏感性、特异性方面进行评价;三种核酸提取方法提取核酸的效率及产物质量进行比较;筛选出更特异、更灵敏、更高效的联合检测方法，为临床检测提供更准确，更快速，更简易的诊断方案。<br>　　方法:采集中国内蒙古自治区通辽市扎鲁特旗人民医院487例就诊布鲁氏菌病患者血液样本，样本分为两种，一种为促凝管血清，另一种为EDTA抗凝全血。获得已知阳性样本312例，阴性样本175例。用487例血清样本进行虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、布鲁氏菌抗体高敏荧光定量试验，对结果进行统计分析，比较其阳性检出率。用患者样本进行核酸提取，用凯杰(QIAGEN)离心柱核酸提取法、血清血细胞同步分离提取法、天隆磁珠机提法三种方法对同一批样本进行核酸提取，用分光光度计测量三种方法所提取核酸的浓度纯度，检测每种提取方法能否进行常规PCR，并比较常规PCR之后的阳性率。对核酸中宿主内参基因GAPDH的含量进行检测，评价核酸中目的DNA的有效浓度。设计常规PCR引物和数字PCR引物及探针，进行引物探针的筛选比较，采用常规PCR、荧光定量PCR,重组酶聚合酶扩增(RPA)、微滴式数字PCR四种分子生物学方法对所有样本进行检测的结果进行比较，分析各种血清学方法和分子生物学方法的敏感性，特异性和总符合率，P＜0.05差异有统计学意义。并对临床常用的血清学方法漏诊误诊的样本进行统计和验证。<br>　　结果:1.对487例患者进行肘正中静脉采血，得血清和全血两种样本，统计患者基本信息、临床症状及患病史。2.血清学方法阳性率由高到低依次是布鲁氏菌抗体高敏荧光定量试验(61.19％，298/487)、其次为RBPT(57.08％，278/487)、SAT(48.67％，237/487)。耗时由长至短依次是SAT、布鲁氏菌抗体高敏荧光定量试验、RBPT。P＜0.01，差异显著具有统计学意义。3.在核酸提取上，产量均为200μL的前提下平均浓度最高的是血清血细胞同步分离提取法，纯度最好的是凯杰(QIAGEN)核酸提取法，对提取后的三种核酸进行常规PCR，其中阳性率由高到低依次是血清血细胞同步分离提取法(53.39％，260/487)、凯杰(QIAGEN)核酸提取法(47.64％，232/487)、天隆机提法(43.32％，221/487)，血清血细胞同步分离提取法提取的核酸中宿主内参基因GAPDH的含量较少，布鲁氏菌目的DNA有效浓度高。4.用血清血细胞同步分离提取法提取的血细胞DNA做常规PCR发现32例抗体检测全阴而常规PCR阳性的样本，并用荧光定量PCR、RPA、数字PCR方法对这32例假阴性样本进行验证，证明临床采用的血清学方法存在漏检误检的情况。5.四种分子生物学方法和三种血清学方法的结果汇总，其中血清学方法RBPT、SAT、布鲁氏菌抗体高敏荧光定量试验的敏感性分别为88.46％，75.96％，95.51％，特异性分别为98.86％，100％，100％。分子生物学方法常规PCR、荧光定量PCR、RPA、数字PCR的敏感性分别为83.33％，86.85％，85.90％，97.12％，特异性分别为100％，97.71％，100％，100％。P＜0.01，差异显著，具有统计学意义。<br>　　结论:血清学方法中布鲁氏菌抗体高敏荧光定量试验敏感性比传统血清学检测(RBPT、SAT)更高，特异性更强，操作简单，耗时较短，血样用量少，是一种非常适合临床或现场检测的方法;核酸提取方面，其中用血清血细胞同步分离提取法从血液样本中提取的核酸受人基因组影响较小，核酸有效浓度高，提取的血细胞DNA做分子生物学方法检测能够检测出血清学方法漏检的样本，对慢性及复发患者的准确诊断有重大意义;在分子生物学方法的比较中，荧光定量PCR、数字PCR能够实现定量，其中数字PCR定量更准确且无需制作标准曲线，敏感性最高，特异性最强，是目前检测效果最好的分子生物学方法;结合临床需要，高敏感性、强特异性的布鲁氏菌抗体高敏荧光试验是可以代替RBPT进行布病筛查的最优抗体检测方法，同时结合特异性较高的SAT方法进一步确认，最后选择数字PCR针对复查和慢性布病患者进行补充检测，可得到最终准确的检测报告。