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摘要胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，胃癌的发生、发展和预后是一个多因素、多通路的综合过程。微小RNA(miRNA)等非编码RNA可以通过表观遗传在转录后水平调控基因表达，从而参与肿瘤细胞的增殖、迁移、自噬和衰老等过程，与胃癌的发生发展密切相关。内源miRNA具有丰富性、特异性、稳定性等特点，在胃癌的诊断、治疗及预后过程中具有成为有效分子标志物的潜力。因此，探讨胃癌发生发展中特异miRNAs及其调控的关键耙基因的作用机制对胃癌的防治具有重要意义。<br>　　实验目的:<br>　　探讨hsa-miR-204耙向组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)调控细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)和细胞周期蛋白E(CyclinE)表达参与胃癌发生发展的作用机制<br>　　方法与结果:<br>　　1.HDAC9在胃癌中高表达<br>　　通过显微切割获取人体上皮组织标本进行筛査，结果显示在浅表性園炎向胃癌逐步恶性转化的过程中，HDAC9的表达逐渐升高。qRT-PCR和免疫组化染色实验检测了HDAC9在18对胃癌和癌旁组织标本以及4种胃癌细胞和胃永生化上皮细胞GES-1中的表达水平，结果显示HDAC9在胃癌组织和胃癌细胞中表达均明显上升。<br>　　2.HDAC9促进胃癌细胞增殖<br>　　在胃癌细胞中转染HDAC9特异小干扰RNA(siRNA)，Westernblotting实验结果显示，抑制HDAC9表达后，CDK2和CyclinE表达下降。通过CCK8实验、克隆形成实验和Edu实验检测细胞的增殖能力，结果发现干扰HDAC9可显著抑制胃癌细胞的增殖能力。<br>　　3.HDAC9表达下降抑制裸鼠体内胃癌细胞的成瘤能力<br>　　我们将成功抑制HDAC9表达的SGC-7901细胞注射到裸鼠皮下成瘤，实验结果表明，HDAC9表达下调后，裸鼠体内胃癌细胞的增殖能力下降。<br>　　4.Hsa-miR-204抑制胃癌细胞增殖<br>　　在胃癌细胞中分别转染hsa-miR-204inhibitor和mimics,通过CCK8实验、克隆形成实验和Edu实验检测细胞的增殖能力，结果发现抑制hsa-miR-204促进胃癌细胞的增殖，过表达hsa-miR-204则抑制胃癌细胞的增殖。<br>　　5.Hsa-miR-204抑制裸鼠体内胃癌细胞的成瘤能力<br>　　我们将成功过表达hsa-miR-204的SGC-7901细胞注射到裸鼠皮下成瘤，实验结果表明，过表达hsa-miR-204后，裸鼠体内胃癌细胞的成瘤能力下降。<br>　　6.胃癌细胞中hsa-miR-204通过调控HDAC9影响CDK2和CyclinE的表达<br>　　在胃癌细胞中分别转染hsa-miR-204inhibitor或mimics,qRT-PCR和Westernblotting结果显示，抑制hsa-miR-204表达后，HDAC9、CDK2和CyclinE的表达上升;而过表达hsa-miR-204后，HDAC9、CDK2和CyclinE表达均下降。<br>　　7.Hsa-miR-204直接结合HDAC9的3''-UTR调控胃癌细胞的增殖<br>　　双荧光素酶活性实验结果表明hsa-miR-204可直接结合HDAC9的3''-UTR区。通过在胃癌细胞共转染hsa-miR-204inhibitor和HDAC9siRNA,Westernblotting检测结果发现抑制hsa-miR-204引起的CDK2和CyclinE表达升高，可以通过抑制HDAC9至少得到部分回复。CCK8实验、克隆形成实验和Edu实验结果也表明，抑制HDAC9可以部分回复miR-204inhibitor对细胞增殖的促进作用。<br>　　实验结论:<br>　　Hsa-imR-204-HDAC9通路调控CDK2和CyclinE表达参与胃癌细胞的增殖。