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摘要目的:<br>　　1、遵循回顾性研究思路，采用Logistic回归方法，寻找发生冠状动脉钙化的危险因素，建立冠状动脉钙化发生的预测模型，为临床筛选冠脉钙化的高危风险患者提供参考。同时统计冠状动脉钙化患者的中医证候要素和临床症状分布，发现冠状动脉钙化发生的常见中医证素。<br>　　2、研究活血化瘀药物丹参-三七药对及其成分原儿茶醛(PCA)-三七皂苷R1(NgR1)药对抗动脉钙化的作用及对TGFβ1/Smad2/3信号通路的影响。在此基础上进一步研究丹参有效成分原儿茶醛(PCA)改善动脉钙化的作用及相关机制，从而为防治动脉钙化提供依据。<br>　　方法:<br>　　1、冠状动脉钙化预测模型的建立:回顾性研究收集行冠脉CT的病例，根据有无钙化斑块形成分为钙化斑块组（366例）和无钙化斑块组(621例)，分别比较分析钙化组和无钙化组的基线资料、既往史、家族史及血液学生化指标，运用Logistic回归分析，寻找冠状动脉钙化斑块形成的危险因素，建立冠状动脉钙化预测模型，并进行验证。冠状动脉钙化中医证候分析:运用统计描述的方法分析冠脉钙化患者的临床症状分布，寻找冠状动脉钙化患者的证候要素特征。<br>　　2、丹参-三七药对及其成分药对抗动脉钙化作用:构建动物钙化模型，分别给予丹参-三七药对、丹参-三七有效成分原儿茶醛(PCA)-三七皂苷R1(NgR1)药对及原儿茶醛(PCA)、三七皂苷R1(NgR1)进行干预，应用病理染色方法观察对动脉钙化的作用，并应用生化试剂盒检测血清血脂、血清钙水平，应用ELISA方法检测血清OPG、RANKL和TGFβ1水平。<br>　　3、PCA和NgR1药对拮抗细胞钙化的作用及对TGF1/Smad2/3信号通路的影响:建立人主动脉平滑肌细胞(HAVSMCs)钙化模型，给予原儿茶醛(PCA)-三七皂苷R1(NgR1)药对及原儿茶醛(PCA)、三七皂苷R1(NgR1)单体进行干预，应用病理染色方法观察PCA+NgR1、PCA和NgR1拮抗钙化的作用，应荧光定量PCR方法检测对成骨标志物及TGFβ1/Smad2/3信号通路中相关基因的mRNA表达。<br>　　4、原儿茶醛(PCA)拮抗动脉钙化机制研究:建立HAVSMCs钙化模型，以原儿茶醛(PCA)为信使药物分别干预HAVSMCs钙化细胞株，运用病理染色、分子生物学方法，观察PCA对细胞钙化的作用，及对TGFβ1/Smad2/3通路和氧化应激的影响。<br>　　5、原儿茶醛(PCA)通过TGFβ1/Smad2/3和Nrf2抑制钙化的机制研究:采用SiRNA沉默靶基因方法研究PCA通过TGFβ1/Smad2/3通路和Nrf2发挥抑制钙化的具体机制。<br>　　结果:<br>　　1、冠状动脉钙化预测模型建立:(1)冠状动脉钙化的预测模型为P=-1.034降脂药+0.02年龄+0.03吸烟+1.14低密度胆固醇+0.01碱性磷酸酶-2.418，以P≥5.128为发生冠状动脉钙化，P＜5.128为未发生冠状动脉钙化。冠状动脉钙化患者常见临床症状为胸闷、头晕、心慌、胸痛、失眠多梦，常见的证素为血瘀。<br>　　2、动物实验表明丹参-三七药对及其有效成分PCA+NgR1、PCA和NgR1能有效降低ApoE-/-小鼠钙化模型的主动脉钙化程度、钙化指标OPG、RANKL和TGFβ1的血清水平，并能降低血脂和血清钙水平。<br>　　3、细胞实验发现丹参-三七有效成分PCA+NgR1、PCA、NgR1可以减轻高钙高磷诱导的HAVSMCs钙化，抑制成骨因子ALPL、COL1A1、BMPR2的mRNA表达，增加成骨因子MGP和SPP1的mRNA表达。进一步研究发现PCA能够抑制TGFβ1，TGFβR1，TGFβR2，Smad2和Smad3的mRNA表达，NgR1对TGFβ1/Smad2/3信号通路没有效应。<br>　　4、细胞实验发现PCA可以抑制高钙高磷诱导的细胞钙化，减少细胞内的钙含量，能够抑制TGFβ1/Smad2/3信号通路中Smad2/3的蛋白表达。进一步研究发现，PCA能升高SOD2的表达，降低ROS的发生，促进P62和Nrf2的蛋白表达，及Nrf2入核，升高Nrf2下游HO-1和NQO1的蛋白表达，沉默Nrf2后，PCA的抗氧化作用及抑制钙化作用消失。给予TGFβ1拮抗剂LSKL和TGFβR1/2双重抑制剂LY2109761干预细胞钙化模型，细胞Nrf2蛋白表达无明显下降。<br>　　5、细胞实验发现PCA可以通过抑制TGFβ1诱导的细胞钙化，沉默Nrf2后，PCA抑制钙化作用消失。进一步发现能够抑制TGFβ1/Smad2/3信号通路中TGFβR1和Smad2/3的蛋白表达。在该钙化模型中，PCA能升高SOD2的蛋白及mRNA表达，促进P62和Nrf2的蛋白表达及Nrf2入核，升高HO-1和NQO1的mRNA表达。进一步沉默P62后，PCA促进P62和Nrf2的表达及Nrf2入核作用消失，升高HO-1和NQO1蛋白表达的作用也消失。<br>　　结论:<br>　　1.冠状动脉钙化常见的中医证素为血瘀。冠状动脉钙化相关的危险因素:年龄、吸烟、低密度胆固醇及碱性磷酸酶为正相关，降脂药为负相关，并构建冠状动脉钙化预测模型。<br>　　2、丹参三七药对及有效成分PCA+NgR1、PCA和NgR1能有效抑制动脉钙化的发生发展。PCA+NgR1和PCA能够抑制TGF1/Smad2/3信号通路，NgR1对TGFβ1/Smad2/3信号通路没有效应。PCA通过抑制TGFβ1/Smad2/3信号通路，进而促进P62和Nrf2表达，促进Nrf2入核，激活下游抗氧化基因发挥抗氧化作用，从而抑制钙化的发生。