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摘要背景及目的:基孔肯雅病毒(Chikungunya virus，CHIKV)是一种具有高度传染性，能够快速传播的蚊媒病毒，属于二类病原体。目前尚无获批上市的针对CHIKV的疫苗或药物。因此，开发针对这种病毒的控制和预防新举措就显得尤为迫切。然而，由于CHIKV的操作只能在Biosafety Level-3(BSL-3)及以上防护等级的实验室中进行，这极大地阻碍了CHIKV相关研究的进展。本文基于这一问题，制备了一种能够在Biosafety Level-2(BSL-2)实验室操作及应用的CHIKV假病毒，降低高致病性真病毒对实验环境的局限要求，促进对CHIKV更广泛的研究。<br>　　方法:本研究以HIV-1慢病毒载体系统为基础，利用实验室前期获得的CHIKV基因，构建含有双报告基因和表达CHIKV包膜蛋白的假病毒，并将其应用到中和抗体的检测当中。整个研究主要分为以下四个部分:第一部分，构建CHIKV假病毒包装系统，对该系统中的一系列包装条件进行优化;第二部分，对优化后得到的病毒粒子进行超离浓缩，并对浓缩后得到的病毒粒子进行免疫印迹检测及电镜观察;第三部分，以该CHIKV假病毒为基础，建立96孔板微中和抗体检测系统，并对该系统中的一系列参数进行优化;第四部分，以所建立的CHIKV假病毒微中和抗体检测系统为基础，对CHIKV灭活病毒免疫兔血清、临床CHIKV康复患者血清进行中和效价检测。<br>　　结果:首先，将CHIKV包膜蛋白基因插入真核表达载体中，利用慢病毒包装系统进行CHIKV假病毒的构建，并对系统中影响病毒滴度的各种包装条件进行优化，最终确定的包装条件为:CHIKV病毒毒株选择1151D4f,去除Capsid表达基因，使用转移质粒pLVX-IRES-ZsGreenl-Luc，以及转染试剂Lipo3000，以质粒摩尔比例1∶1∶1的条件进行转染，得到的假病毒滴度为1.61×105TU/ml。然后，利用第一步成功构建的CHIKV假病毒，建立了假病毒微中和抗体检测系统，并对各种检测参数进行优化，最终确定的中和实验检测参数为:HEK-293T细胞50000个/孔，病毒接种量为500TU/孔，于感染后96h检测发光信号强度并计算中和抗体效价，能够得到最准确、最稳定的实验结果。接下来，利用上一步建立的CHIKV假病毒微中和抗体检测系统，对CHIKV灭活病毒免疫兔血清进行中和效价检测，通过与VSV-G假病毒中和实验结果进行对比，证明本研究所构建的CHIKV假病毒在中和抗体检测中具有良好的特异性。最后，也利用建立的CHIKV假病毒微中和抗体检测系统，对临床CHIKV康复患者血清进行了中和效价检测，并将检测结果与ELISA检测结果进行了对比，发现二者具有良好的相关性与一致性。由此可见，本研究所建立的CHIKV假病毒微中和抗体检测系统，具有良好的可靠性与灵敏度，可以替代传统的中和实验对血清等样品进行中和效价检测，且操作更加方便，结果更加客观。<br>　　结论:本研究成功构建了双报告基因CHIKV假病毒，并基于该假病毒建立了安全、可靠的微中和抗体检测系统，为在BSL-2实验室中，开展CHIKV相关研究，例如抗病毒药物筛选、单克隆抗体筛选、疫苗评价等提供了有效的手段。