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摘要研究背景及目的:<br>　　肺癌作为全球范围最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率居高不下。肺癌分为小细胞肺癌(Smallcelllungcancer，SCLC)和非小细胞肺癌(Non-smallcelllungcancer，NSCLC)，其中非小细胞肺癌约占85％。尽管近年来诊断技术和医疗条件不断进步，但是肺癌患者的预后生存并没有显著提高。目前，癌症的转移已经是威胁肺癌患者生命的主要原因。在癌症发生早期往往会伴随EMT(Epithelial-mesenchymaltransition)事件的发生。转化生长因子β(transfominggrowthfactorβ，TGF-β)信号通路已经被证实可以促进多种癌症的EMT、转移和侵袭。OTUD5(OTUDomain-ContainingProtein5)是去泛素化酶家族OTUs(ovariantumor-relatedproteases，OTUs)中的一员，具有调节蛋白稳定和活性的功能。然而，OTUD5在NSCLC中异常表达以及其是否影响TGF-β诱导的NSCLC的EMT以及迁移和侵袭尚未报道。本文旨在揭示OTUD5在NSCLC中表达情况以及OTUD5调控TGF-β诱导的NSCLC的EMT以及迁移和侵袭的分子机制，以期为NSCLC的分子诊断和临床治疗提供一定的理论基础。<br>　　研究方法:<br>　　1)利用Real-timePCR检测OTUD5在NSCLC中的表达情况，分析癌组织与癌旁组织中OTUD5的表达差异。<br>　　2)以癌症基因组图谱(TheCancerGenomeAtlas，TCGA)数据库分析OTUD5在NSCLC的表达情况以及OTUD5表达与预后生存的关系。<br>　　3)利用GEO(GeneExpressionomnibus)数据集对OTUD5进行单基因GSEA(GeneSetEnrichmentAnalvsis)分析，以期找到参与OTUD5表达调控的信号通路并进行验证。<br>　　4)采用慢病毒感染A549和H1650构建OTUD5稳定过表达和沉默表达细胞株，刚si-RNAs瞬时转染对目标基因进行敲降，Real-timePCR和Westernblot实验检测过表达和敲降效果。<br>　　5)在A549和H1650细胞中，Westernblot检测OTUD5过表达和敲降细胞中EMT标志物的表达情况以及TIF1γ的表达和半衰期。<br>　　6)Transwell迁移和侵袭实验检测OTUD5对NSCLC细胞的迁移和侵袭能力的影响。<br>　　7)利用蛋白质免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation，Co-IP)实验、免疫荧光(Immunonuorescence)实验以及点突变实验分析OTUD5对TIF1γ的翻译后修饰的调控机制。<br>　　8)开展拯救实验，在OTUD5过表达的A549和H1650细胞中敲降TIF1γ，Westernblot检测EMT标志物的表达情况，Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力。<br>　　研究结果:<br>　　1)通过分析TCGA数据库，以及对74例NSCLC组织及对应癌旁组织样本的检测发现，相对于癌旁组织，OTUD5mRNA在NSCLC中显著下调表达。OTUD5低表达与NSCLC不良预后显著相关。<br>　　2)GSEA基因富集分析显示OTUD5高表达与TGF-β信号通路显著负相关，且TGF-β1显著抑制OTUD5mRNA和蛋白的表达。<br>　　3)在A549和H1650细胞株中过表达OTUD5抑制TGF-β诱导的NSCLC细胞的EMT、迁移和侵袭。相反，敲降OTUD5能够促进TGF-β诱导的NSCLC细胞EMT以及迁移和侵袭能力。<br>　　4)0TUD5促进TGF-β信号通路负调控因子TIF1γ的表达，并且OTUD5可延长TIF1γ的半衰期，促进其稳定。<br>　　5)OTUD5与TIF1γ存在直接的相互作用，OTUD5去泛素化TIF1γ且该过程依赖其酶活。<br>　　6)敲降TIF1γ，削弱了OTUD5对TGF-β诱导的NSCLC细胞的EMT、迁移和侵袭的抑制作用。<br>　　研究结论:<br>　　本研究揭示了OTUD5抑制TGF-β诱导的NSCLC细胞EMT，并削弱了细胞的迁移和侵袭能力。进而发现上述抑制作用是通过OTUD5去泛素化TIF1γ并上调后者蛋白表达来实现的。该研究对于研究TGF-β信号通路参与NSCLC侵袭转移机制提供了新的研究思路。