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摘要大多数癌症患者死于肿瘤转移而非原位肿瘤进展。肿瘤细胞逃避促凋亡信号是肿瘤转移发生的关键原因。失巢凋亡是一种由于细胞与细胞外基质或其他细胞失去接触而诱导的特殊的细胞死亡形式，在抑制肿瘤转移方面具有重要作用。克服失巢凋亡是转移性肿瘤细胞在循环中存活以及在远端器官定植生长的关键步骤，但其中的分子机制仍有待完全破译<br>　　本研究旨在鉴定和解析参与失巢凋亡抵抗从而促进癌细胞向远处转移的分子途径。为此，我们将宫颈癌细胞系HeLa在低贴壁培养皿中强制悬浮培养（模拟失巢状态），并在不同时间点收集细胞进行RNA测序以阐明失巢过程中癌细胞的分子变化。研究结果显示，失巢后癌细胞在葡萄糖代谢、氧化磷酸化和蛋白酶体功能等方面都出现失调现象。值得注意的是，失巢后癌细胞中液泡ATP酶（Ⅴ-ATP酶）的表达显著上调。Ⅴ-ATPase是一种酶复合物，它利用ATP水解产生的能量来维持细胞稳态。据报道，Ⅴ-ATPase表达可促进癌症进展。本研究表明抑制Ⅴ-ATPase活性显著增加癌细胞(人宫颈癌细胞系(HeLa)、人乳腺癌细胞系(MCF-7)和鼠黑色素瘤(B16F10))对失巢凋亡的敏感性，抑制B16F10黑色素瘤在小鼠模型中的肺转移。进一步研究发现，该作用主要通过增加活性氧(ROS)和错误折叠蛋白的积累实现。清除ROS可降低癌细胞中错误折叠蛋白水平、恢复对失巢凋亡的抵抗。机制上，STAT3上调Ⅴ-ATPase表达，促进癌细胞对失巢凋亡的抵抗。阻断STAT3活性显著抑制肿瘤细胞中Ⅴ-ATP酶的表达，导致ROS增加和错误折叠蛋白积累，最终提高癌细胞对失巢凋亡的敏感性。<br>　　类似地，我们也使用二甲双胍和蛋白酶体抑制剂来分别靶向失巢后发生异常调控的氧化磷酸化途径和蛋白酶体活性。结果发现，单独使用二甲双胍或蛋白酶体抑制剂都会促进ROS产生和错误折叠蛋白积累，增加宫颈癌、乳腺癌和鼠黑色素瘤细胞对失巢凋亡的敏感性，并在小鼠模型中抑制B16F10黑色素瘤的肺转移。机制上，二甲双胍减少了细胞ATP的产生，激活了AMPK;后者通过增强失巢细胞中CHOP的表达来促进促凋亡的未折叠蛋白反应(pro-apoptoticUPR)。阻断AMPK显著减少错误折叠蛋白的积累，进一步强调了AMPK激活在二甲双胍诱导的应激和UPR介导的细胞死亡中的重要作用。<br>　　总之，这项工作证明了STAT3介导的Ⅴ-ATPase上调以及失调的AMPK/CHOP细胞应激信号通路在失巢凋亡抵抗方面的新作用。该研究不仅为失巢凋亡抵抗的分子生物学机制提供了新的见解，也为肿瘤转移治疗提供了新的靶点和潜力方案。