检索历史 清除

摘要研究背景：<br>　　痛性糖尿病神经病变(painful diabetic neuropathy, PDN)是指由糖尿病或糖尿病前期导致的神经病理性疼痛，常表现为双侧对称性肢体远端疼痛，严重降低患者的生活质量。目前对PDN的发生机制尚不明确，临床治疗以降糖、止痛为主，但不能大幅度延缓PDN的转归，效果欠佳。研究表明炎症是PDN神经损伤的重要因素，而TBK1/IKKε在炎症中发挥重要作用，其在PDN的作用尚未见报道，利用TBK1/IKKε的阻断剂Amlexanox治疗PDN成为可能，为改善PDN提供参考。<br>　　研究目的：<br>　　阐明TBK1和IKKε蛋白是否通过上调炎症介导PDN痛觉敏化症状;探究Amlexanox对PDN小鼠TBK1/IKKε表达水平、糖代谢、炎症反应的影响，明确其是否可改善PDN，为临床防治PDN提供参考。<br>　　研究方法：<br>　　本实验分为两部分，第一部分小鼠分4组:db/db小鼠和其同窝对照m/m小鼠;C57BL/6J小鼠和经STZ诱导的C57BL/6J小鼠。通过每周检测血糖、PWT和PWL值并结合血清胰岛素水平测定，筛选出T1DM和T2DM相关PDN模型小鼠，取L4-L6节段脊髓组织进行Western Blot实验，观察p-TBK1、IKKε和TNF-α的表达水平;通过免疫荧光观察脊髓背角中TNF-α的表达情况。<br>　　第二部分饲养m/m小鼠和db/db小鼠，通过每周检测PWT和PWL值，建立T2DM相关PDN模型后，将m/m小鼠随机均分为2组:m/m组和m/m+AMX组，将db/db小鼠随机均分为2组:db/db组和db/db+AMX组。m/m+AMX组及db/db+AMX组每天予灌胃Amlexanox，并继续每周观察各组小鼠PWT、PWL以及血糖体重变化，在干预4周后取小鼠血清、L4-L6段脊髓、背根神经节、坐骨神经及足底皮肤。采用ELISA测定血清胰岛素和炎症因子含量;采用Western Blot检测脊髓中p-TBK1、IKKε、p-IRF3含量以及TNF-α在脊髓和背根神经节中的表达水平;采用免疫荧光检测小鼠脊髓背角TNF-α的表达情况;探讨脊髓小胶质细胞聚集与极化在PDN中的改变;通过检测坐骨神经形态、足底皮肤血流灌注和表皮内神经纤维密度，评估PDN在外周的改善情况。<br>　　研究结果：<br>　　1、成功建立T1DM和T2DM相关PDN小鼠模型，其脊髓组织p-TBK1和IKKε表达水平增高，炎症反应上调。<br>　　2、T2DM相关PDN小鼠予Amlexanox后痛觉敏化缓解，但不影响血糖体重。<br>　　3、Amlexanox可抑制PDN小鼠脊髓组织中小胶质细胞的聚集与M1型极化，下调炎症反应，也可抑制背根神经节的炎症反应。<br>　　4、Amlexanox可改善PDN小鼠坐骨神经变性与足底皮肤血流灌注，缓解足底皮肤表皮内神经纤维的缺损。<br>　　研究结论：<br>　　1、T1DM和T2DM相关PDN小鼠均出现痛觉敏化，脊髓中TBK1和IKKε被激活，炎症反应上调。<br>　　2、Amlexanox可通过抑制TBK1和IKKε，阻断脊髓小胶质细胞聚集及向M1型极化，从而减轻炎症、改善PDN痛觉敏化，也可一定程度上减轻DRG炎症及坐骨神经变性、改善足底皮肤血流灌注并缓解表皮内神经纤维的缺损。