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摘要研究背景:<br>　　神经内分泌肿瘤(NENs)是起源于神经内分泌细胞的一类肿瘤，其早期诊断率较低，很多患者在确诊时已处于晚期。由于多数NENs细胞表面高表达生长抑素受体(SSTR)，所以目前SSTR显像被认为是检测NENs最敏感的方法。然而胃肠胰NENs中常见的胰岛素瘤低表达SSTR，但高表达胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)。针对肿瘤本身具有异质性的特点，为了提高NENs的检出率，本实验拟针对NENs细胞常见高表达的生长抑素受体及胰高血糖素样肽-1受体的，构建一种新型的双靶点分子探针DOTA-exendin-4-TOC，使其同时靶向SSTR和GLP-1R，用68Ga对其进行放射性标记，探讨68Ga-DOTA-exendin-4-TOC作为新型NENs靶向药物的可行性。<br>　　研究目的:<br>　　1.构建能同时靶向SSTR和GLP-1R一种新型双靶点分子探针DOTA-exendin-4-TOC。<br>　　2.建立68Ga标记双靶点分子探针DOTA-exendin-4-TOC的放射性标记方法。<br>　　3.探究68Ga-DOTA-exendin-4-TOC作为新型分子探针应用于NENs肿瘤显像的可能性。<br>　　研究方法:<br>　　1.合成双靶点分子探针DOTA-exendin-4-TOC并对其性能进行分析鉴定。<br>　　2.采用双功能螯合剂法进行68Ga标记DOTA-exendin-4-TOC并使用Radio-HPLC分析法测定标记产物的放化纯度。<br>　　3.使用Radio-HPLC分析法进行标记产物的体外稳定性研究;使用γ计数器测定标记产物的体内稳定性及脂水分配系数。<br>　　4.体外细胞摄取实验评价68Ga-DOTA-exendin-4-TOC对受体SSTR及GLP-1R的结合亲和力。<br>　　5.选择GLP-1R和SSTR均表达的RIN-M5F细胞系、GLP-1R高表达的INS-1细胞系和SSTR高表达的细胞系，构建荷瘤裸鼠动物模型并经病理验证。<br>　　6.经尾静脉注射68Ga-DOTA-exendin-4-TOC，研究其在肿瘤模型中的体内生物分布及MicroPET/CT显像。<br>　　结果:<br>　　1.合成的DOTA-exendin-4-TOC纯度大于95％，质谱分析主峰分子量与理论分子量相符，满足实验要求。<br>　　2.68Ga标记DOTA-exendin-4-TOC的标记方法简单，且产物放化纯度高(大于95％)，产物峰单一。<br>　　3.68Ga-DOTA-exendin-4-TOC在PBS缓冲溶液中孵育60min、120min其放化纯度仍大于95％，有着良好的体外稳定性。<br>　　4.在脂水分配实验中，68Ga-DOTA-exendin-4-TOC的脂水分配系数logP(正辛醇/PBS)为-2.02±0.05，提示所制备的标记多肽为亲水性物质。<br>　　5.体外细胞摄取实验结果显示RIN-M5F细胞、INS-1细胞、AR42J细胞对68Ga-DOTA-exendin-4-TOC均有摄取，RIN-M5F细胞、INS-1细胞对68Ga-DOTA-exendin-4-TOC的摄取益线相似,在60min时出现峰值;而AR42J细胞对68Ga-DOTA-exendin-4-TOC摄取值高于另外两种细胞的摄取值，且AR42J细胞在0min至120min对68Ga-DOTA-exendin-4-TOC的摄取呈持续上升趋势。<br>　　6.成功构建荷RIN-M5F细胞、INS-1细胞及AR42J细胞肿瘤动物模型，并病理验证。<br>　　7.荷RIN-M5F细胞、INS-1细胞及AR42J细胞肿瘤动物模型的MicroPET/CT显像表明三种肿瘤模型对68Ga-DOTA-exendin-4-TOC均有摄取，在60min及120min时三种肿瘤的摄取分别为RIN-M5F肿瘤摄取值0.87±0.11(60min)、0.80±0.08(120min);INS-1肿瘤摄取值1.57±0.12(60min)、1.2±0.10(120min);AR42J肿瘤摄取值133±0.12(60min)、1.50±0.10(120min)。<br>　　8.荷RIN-M5F细胞、INS-1细胞及AR42J细胞肿瘤动物模型的生物分布结果显示，荷INS-1细胞及AR42J细胞肿瘤对68Ga-DOTA-exendin-4-TOC均有摄取，而荷RIN-M5F细胞肿瘤对68Ga-DOTA-exendin-4-TOC摄取较低;68Ga-DOTA-exendin-4-TOC在裸鼠体内集中分布在肾脏内。<br>　　结论:<br>　　1.本研究成功进行68Ga对DOTA-exendin-4-TOC的放射性标记，利用双功能螯合剂法制备简单，且放化纯度高（大于95％），在体内外均具有良好的稳定性;68Ga-DOTA-exendin-4-TOC为亲水性物质，能通过泌尿系统排泄。<br>　　2.体外细胞实验表明68Ga-DOTA-exendin-4-TOC可特异性被RIN-M5F细胞、INS-1细胞及AR42J细胞摄取。<br>　　3.MicroPET/CT显像及生物分布实验结果表明荷RIN-M5F细胞、INS-1细胞、AR42J细胞动物模型均能特异性摄取68Ga-DOTA-exendin-4-TOC，在后续研究中，将继续改善双靶点分子探针的受体-配体亲和力。