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摘要目的:<br>　　我们采用观察性研究和实验研究的初步探讨，基于吲哚箐绿(ICG)的显影作用，对临床上已发表的关于宫颈癌前哨淋巴结(SLN)活检的文献进行Meta分析，分析ICG用于宫颈癌前哨淋巴结显影的敏感度和特异度。基于ICG的光热作用，对单纯ICG用于宫颈癌细胞光热作用的机制进行研究。从ICG显影的角度，选择将临床上使用安全的ICG进行荧光纳米探针修饰，基于近红外(NIR)光的激发，在近红外Ⅰ/Ⅱ荧光两个波段的激发光下，将吲哚菁绿-丝素蛋白(SF@ICG)纳米颗粒用于宫颈疾病成像做深入研究。从ICG光热的角度，将化疗药物阿霉素(DOX)包覆载有吲哚箐绿-白蛋白(BSA@ICG)纳米颗粒系统中，形成一种吲哚箐绿-白蛋白-阿霉素(BSA@ICG-DOX)的复合纳米颗粒。用NIR波段内的激发光照射，通过光热转换促进化疗药物DOX的释放，将纳米颗粒(BSA@ICG-DOX)用于宫颈癌的治疗，实现对肿瘤细胞光热治疗和化学治疗的联合治疗，并进一步探讨和研究光化学治疗在宫颈癌治疗中安全性，稳定性及治疗效果，为宫颈癌的光热治疗提供前期实验基础。<br>　　方法:<br>　　第一部分:使用Meta分析系统评价ICG前哨淋巴结活组织显影用于宫颈癌早期盆腔淋巴结转移诊断的临床价值。使用QUADAS-2工具进行文献质量评价，用Stata17.0软件对纳入指标进行统计学分析。参照纳入和排除标准对此项研究所需文献展开筛选。通过CCK-8实验，共聚焦实验，细胞划痕实验对单纯ICG用于宫颈癌细胞的光热治疗效果进行研究，通过WesternBlot实验对宫颈癌细胞光热治疗作用的机制进行研究。第二部分:1）通过共沉淀的方法将ICG与丝素蛋白(SF)纳米颗粒进行了荧光纳米探针修饰，近红外测温仪比较ICG与SF@ICG纳米颗粒的稳定性以及环境因素下光热性能的衰减情况。CCK-8实验，H&E染色，溶血实验分析纳米颗粒的毒性。共聚焦实验和流式细胞仪实验观察在细胞层面HeLa细胞摄取纳米颗粒和光热治疗的效果。2）在活体层面，观察SF@ICG纳米颗粒的体内生物学分布，利用NIR-Ⅰ和NIR-Ⅱ荧光成像系统采集前哨淋巴洁和淋巴管的图像及荧光应用。3）利用SF@ICG纳米颗粒在NIR-Ⅱ的荧光特性，将SF@ICG纳米颗粒注射于SD大鼠宫腔，进行NIR-Ⅱ实时成像方法观察活体内宫腔造影的应用。第三部分:1）将ICG与白蛋白(BSA)纳米颗粒进行了荧光纳米探针修饰，近红外测温仪比较ICG与BSA@ICG纳米颗粒稳定性以及环境因素下光热性能的衰减情况，共聚焦实验观察HeLa细胞对纳米颗粒的摄取情况;2）将制备的BSA@ICG纳米颗粒通过尾静脉注射到宫颈肿瘤荷瘤小鼠体内。注射后24h进行深部组织和高分辨率近红外荧光成像进行蛋白纳米颗粒的肿瘤靶向性实验;3）对BSA@ICG-DOX纳米颗粒在小鼠宫颈皮下肿瘤模型中的体内光疗与化学治疗联合治疗抗肿瘤作用进行了评价。<br>　　结果:<br>　　1.本部分研究提取文献12篇，中文文献3篇，根据诊断性试验QUADAS-2量表评分，得到ICG前哨淋巴结活检的敏感度为0.87，特异度为1，通过SLN活检诊断宫颈癌盆腔淋巴结转移具一定可靠性。汇总ROC曲线中AUC等于1.0，可见在诊断宫颈癌SLN活检方面，ICG具较高可信度，可用来检测诊断宫颈癌盆腔LN转移。本部分实验结果中与对照组相比，ICG作为单纯的光热剂，给予808nm激发光照射后，抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低，而促凋亡蛋白Bax和Caspase-3活性水平均显著增加，以P＜0.05为差异有统计学意义，本部分研究说明了ICG对宫颈癌细胞光热治疗后发生凋亡的机制。2.我们通过共沉淀法自组装设计并合成了SF@ICG纳米颗粒。SF@ICG纳米颗粒在体外更易被HeLa细胞内化。显然，纳米颗粒具有较低的细胞毒性。在808nm近红外辐照下，SF@ICG纳米颗粒在体外表现出稳定的光热效应。SF@ICG纳米颗粒的荧光信号在NIR-Ⅱ光谱窗口下的水分散显著增加。SF@ICG纳米颗粒在BALB/c裸鼠NIR-Ⅰ/NIR-Ⅱ窗口的前哨淋巴结荧光成像具有明亮的荧光。SF@ICG纳米颗粒的NIR-Ⅱ荧光宫腔造影在大鼠的活体输卵管造影中勾画子宫轮廓和自然蠕动时表现较好，获得了高分辨率的荧光成像图像。3.BSA@ICG-DOX纳米颗粒在小鼠宫颈皮下肿瘤模型中的体内抗肿瘤作用进行了评价，将BSA@ICG-DOX纳米颗粒静脉注射到荷瘤小鼠体内，用808nm激光治疗后24h进行热成像。肿瘤部位的温度在10分钟内达到46℃，明显高于PBS处理的对照组小鼠。然后用BSA@ICG-DOX纳米颗粒对裸鼠肿瘤进行808nm激发化疗/光热治疗。监测荷瘤小鼠肿瘤体积和体重，观察2周。BSA@ICG-DOX纳米颗粒在808nm激光照射下对肿瘤有明显的抑制作用。<br>　　结论:<br>　　1.ICG对于宫颈癌的SLN活检具有较高可信度，可用来测定宫颈癌盆腔淋巴结转移诊断，但仍需要大样本文献的支持。ICG在NIR激光的照射下能够将光能转化为热能，这些作用是通过Caspase-3和Bax呈现高表达，而Bcl-2呈低表达实现的。2.将ICG进行使用丝素蛋白(SF)纳米颗粒荧光纳米探针修饰，具有良好的生物相容性，在NIRⅠ/Ⅱ荧光的SF@ICG纳米颗粒可用于前哨淋巴结显影，在NIR-Ⅱ荧光成像系统下可用于大鼠的活体子宫输卵管造影。3.BSA@ICG-DOX纳米颗粒具有较强的近红外荧光发射和宫颈肿瘤靶向性，具有良好的光热性能、生物相容性和低毒性，近红外可激发/发射和靶向BSA@ICG-DOX纳米颗粒能够对皮下宫颈肿瘤进行良好的诊断和化疗/光热治疗。