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摘要ILC1s（type1innate lymphoid cells，1型固有淋巴细胞）与cNK(conventional natural killer，传统自然杀伤)细胞同属于Group1ILCs(group1innate lymphoid cells，第一类固有免疫细胞)。我们课题组首次描述了肝脏特有NK细胞新亚群，后被学界归入ILC1s，并发现在肝脏中ILC1s是优势细胞群，因此肝脏成为研究ILC1s的重要窗口。以往围绕肝脏ILC1s的研究显示该群细胞的功能具有多样性和特异性。例如，在半抗原诱导的CHS（contact hypersensitivity，接触性超敏反应）中肝脏ILC1s参与介导半抗原特异的免疫记忆应答;在病毒感染早期肝脏ILC1s可以快速分泌IFN-γ(interferon-γ，干扰素-γ）分子完成抗病毒应答。此外，不同于已报道的具有低细胞毒性的粘膜ILC1s，肝脏ILC1s具有更强的细胞毒活性。肝脏ILC1s功能的多样性和特异性是否暗示ILC1s是一个异质性群体呢？在个体发育早期，适应性免疫应答大大受限，反而更加突出固有免疫系统的重要性，这是否暗示固有免疫应答在新生期具有更为特殊的意义呢？有趣的是，在胚胎期和新生期，相比于cNK细胞，ILC1s的比例和数目都占据优势地位。这是否暗示肝脏ILC1s在新生期具有重要作用呢？<br>　　基于以上问题，我们展开了对肝脏ILC1s异质性的研究，结果如下:<br>　　1.单细胞测序揭示肝脏Group1ILCs异质性<br>　　通过单细胞RNA测序和流式细胞术两种手段，我们发现肝脏Group1ILC1s可以划分为5个细胞集群(C1-C5)，其中C1-C3代表肝脏cNK细胞的三个已知的不同发育阶段;而C4和C5分别代表肝脏ILC1s的两个细胞集群。<br>　　2.肝脏ILC1s具有两个细胞亚群<br>　　为进一步在蛋白水平验证肝脏ILC1s异质性，我们采用流式细胞术进行检测，发现Ly49E分子可以将肝脏ILC1s划分为两群细胞。过继转输实验和转录组分析进一步说明肝脏ILC1s的Ly49E+和Ly49E-细胞是两个独立且不同的细胞亚群。<br>　　3.肝脏ILC1s亚群的个体发生具有差异<br>　　动态检测小鼠个体发生不同阶段Ly49E分子的表达，我们发现肝脏Ly49E+和Ly49E-ILC1s的表达时相相反，其中Ly49E+ILC1s在新生阶段大量富集，随着小鼠年龄增加逐渐被Ly49E-ILC1s替代。同时，我们还发现出生后的骨髓造血无法有效产生Ly49E+ILC1s。此外，转录组分析结果提示新生期Ly49E+ILC1s具有介导早期免疫应答的能力。<br>　　4.Ly49E+ILC1s具有较强的细胞毒性<br>　　为探究肝脏Ly49E+和Ly49E-ILC1s的免疫学功能，我们用不同刺激方式活化肝脏淋巴细胞并发现肝脏Ly49E+ILC1s表达高水平颗粒酶且具有较强细胞毒性。<br>　　5.Ly49E+ILC1s介导新生期抗病毒保护应答<br>　　为探究新生阶段Ly49E+ILC1s的免疫学功能，我们构建新生小鼠MCMV（murine cytomegalovirus，小鼠巨细胞病毒）感染模型。病毒滴度的检测结果显示，Ly49E+ILC1s缺失的小鼠更易感染病毒，而过继转输Ly49E+ILC1s可以有效降低肝脏的病毒载量。<br>　　6.Ly49E-ILC1s具有免疫记忆潜能<br>　　由于适应性免疫是后天逐渐获得的，并且随着年龄增加Ly49E-ILC1s比例也逐渐增加，我们推测成年Ly49E-ILC1s可能参与介导免疫记忆应答。通过实验我们发现Ly49E-ILC1s高表达包括IL-7Rα分子在内的免疫记忆相关分子，并且参与半抗原介导的CHS应答。<br>　　综上所述，Ly49E分子可将肝脏ILC1s划分为两个亚群。其中Ly49E+ILC1s具有更强的细胞毒性，且在新生小鼠肝脏中优势存在，可以介导早期抗病毒保护应答;而成年小鼠肝脏以Ly49E-ILC1s为主，该群细胞具有免疫记忆潜能。我们的研究揭示了肝脏ILC1s亚群在个体发生中与功能多样性相适应的动态变化，而该异质性正好满足了个体发育不同阶段与年龄相关且多样的免疫需求。