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鳞砗磲Tridacna squamosa抗氧化通路TsNrf/TsMafK的基因克隆、功能及调控研究

摘要bZIP-NFE2L (Basic leucine zipper nuclear factor, erythroid-derived 2 like)亚家族成员是一类主要调控抗氧化基因的核心转录因子,其成员Nrf1、Mrf2(Nrf, Nuclear factor, erythroid 2 like)等与sMaf(Small musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog)家族成员MafK组成了生物体抗氧化核心通路,防止生物体遭受内源或外来的ROS (Reactive oxygen species)的伤害。鳞砗磲是一种与虫黄藻共生的珊瑚礁贝类,在珊瑚礁生态系统中具有重要地位。随着海洋环境日益恶化,环境条件的改变会破坏体内氧化-抗氧化平衡,导致鳞砗磲的生存受到威胁。研究鳞砗磲核心抗氧化通路TsNrf/TsMafK基因,有助于理解其抗氧化机制,从而为保护砗磲提供重要的理论依据。<br>  通过基因克隆与分析发现,TsNrf是鳞砗磲中bZIP-NFE2L亚家族的唯一成员,其氨基酸序列在结构上接近于哺乳动物的Nrf1;TsMafK属于sMaf家族,氨基酸序列在不同物种间高度保守。通过EMSA实验与双荧光素酶分析发现,保守的DNA结合域使TsNrf、TsMafK能够在体外或体内与典型ARE(Antioxidant reaction element)序列结合,说明该通路具有种间保守性。基于典型ARE序列矩阵,对TsNrf下游基因的预测结果显示,TsNrf主要调控抗氧化相关基因,这些基因多在鳃中特异性高表达,表明TsNrf/TsMafK通路主要在鳃组织发挥调控作用。通过对下游基因肌肽合成酶TsATPGD的验证发现,Nrf2抑制剂ML385能有效抑制TsNrf的对TsATPGD启动子核心元件的结合,降低鳃组织TsATPGD的表达和L-肌肽含量,同时使鳃组织脂质过氧化水平显著升高。<br>  该结果表明,TsNrf通过调控TsATPGD的表达从而调节氧化-抗氧化平衡。该独特抗氧化通路的发现与验证,为鳞砗磲的抗氧化机制提供了一定见解。

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学位信息:
中国科学院大学 生物学 生物工程(硕士) 2022年
分类号 Q959.215.03
发布时间 2023-05-17(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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