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自闭症肠道菌群组成与人粪杆菌对模型小鼠的干预评估

摘要自闭症也称孤独症,是孤独症谱系障碍(AutismSpectrumDisorder,ASD)的简称。它是一种基因与环境等多因素导致的神经发展障碍性疾病,其主要症状包括重复刻板的行为、狭窄的兴趣范围以及社会交往障碍等。自闭症的诊断,仅可依据行为度量评价表由有经验的临床医生进行,目前尚无明确的治疗方法。随着患病率的逐渐攀升,自闭症已经成为一种危害公共健康安全的疾病,不仅患者饱受痛苦,同时给家庭和社会也会带来极大的负担。<br>  本文通过对2010-2020年间公开发表的数据收集与整理发现,自闭症患者的肠道微生物组中,拟杆菌科和普雷沃氏菌科均在自闭症患者队列中丰度较高;在属水平上,拟杆菌属、脱硫弧菌属、芽孢杆菌属和梭杆菌属得到了富集,而丁酸单胞菌、链球菌属、放线菌属、梭菌X1Va类群、阿克曼氏菌属和臭气杆菌属的微生物缺乏。<br>  为了更深入地分析自闭症患者肠道微生物的组成,本研究收集了81例自闭症和62例发育正常的健康人粪便样本,并对其肠道微生物16SrRNA基因(V3-V4区)的扩增子数据进行分析,发现自闭症微生物的微生物群落组成与健康对照组相比具有显著差异。在差异物种的分析中发现,自闭症患者存在更高丰度的梭菌科SMB53类群、拟杆菌属和毛螺菌属微生物,而缺少埃格特菌属、瘤胃球菌属、颤螺菌属、颗粒链菌属、真杆菌属、霍尔德曼氏菌、乏氧菌属、链球菌属、阿克曼氏菌属、多尔氏菌属和粪杆菌属的微生物。通过随机森林模型,构建了正确率为85%的自闭症肠道微生物特征模型,为自闭症的生物标记物检测提供理论基础。<br>  对自闭症样本和健康样本直接以BHI培养基、或者经过酒精处理后使用改良的YCFA、在厌氧条件下进行选择性的分离培养。基于16SrRNA基因序列的比对结果表明,共计获得了426株纯培养微生物,可划分为72个物种,属于38属、21科、12目、9纲和4门,分离培养得到最多的是厚壁菌门、可以产芽胞的梭菌属细菌,其次是肠道微生物中丰度很高的拟杆菌属微生物。由自闭症样本中分离获得了1个中级别的“Mostwanted”菌种。另外,发现35株17个物种的16SrRNA基因与最相近物种的相似度小于98.7%,可能是潜在的新物种。通过对细菌的培养和表型观察、细菌的生理生化特征挖掘、细菌的细胞组成成分分析、细菌的基因组比较与分析以及基于细菌的16SrRNA基因的系统发育分析这五个方面对潜在新物种进行多相分类学研究,最终确定其分类学地位并将其提名为新的物种。<br>  通过将分析的扩增子数据与分离培养得到物种的16SrRNA基因合并分析,发现自闭症患者肠道微生物中可能最为缺乏的物种,是一个潜在的新物种,通过多相分类学鉴定将其命名为人粪杆菌(Faecalibacteriumhominis)。随后,选用人粪杆菌的模式菌株4P-15T对自闭症BTBR模型小鼠进行了为期30天的连续灌胃干预。通过行为学检测发现,菌种灌胃的BTBR小鼠在焦虑程度和刻板行为方面得到了显著的缓解,并且社会交往能力具有一定的改善。该菌种可以短期存在于小鼠肠道中,但没有在灌胃结束后一个月保持长期定殖。对比菌种灌胃组和对照组,小鼠粪便中的短链脂肪酸含量和大脑中白介素-6水平以及5-羟色胺的含量没有明显的变化,只有脑组织中的多巴胺含量略有增加。该菌株对于自闭症症状改善具有一定效果,是辅助治疗自闭症患者的潜在菌株资源。

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导师 刘双江
学位信息:
中国科学院大学 生物学 微生物学(博士) 2022年
分类号 R749.94
发布时间 2023-05-25
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