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摘要新型冠状病毒简称新冠病毒，属于冠状病毒科。冠状病毒得名于其囊膜上的蛋白质——刺突蛋白，结构呈皇冠状。冠状病毒科又可分为α、β、γ和δ冠状病毒属。引起此次新型冠状病毒肺炎疫情全球大流行的元凶——新冠病毒，属于β冠状病毒。1960s至今，包括此次新冠肺炎疫情在内，由冠状病毒引起的较严重的流行病共有7起，其中有5次是β冠状病毒造成的。此外，本次疫情自2019年暴发到2022年截稿，仍在人类社会肆虐，甚至全球范围内有些地区的病毒传播处于将近失控的状态。<br>　　刺突蛋白(Spike，S)介导病毒的受体识别和膜融合。S上受体识别区域(Receptorbindingdomain，RBD)结合血管紧张素转化酶(Angiotensin-convertingEnzyme，ACE2)，打开进入细胞的“大门”。ACE2尽管最先被鉴定为是病原感染人的受体，但是越来越多研究发现，其他不同物种中的同源蛋白也能够作为受体被RBD结合。这表明该病原微生物具有广泛的宿主和中间宿主，暗示其传播链也具有多种可能。同时有研究发现狗核酸检测为阳性，新冠病毒仍未溯源，中间宿主也不清晰。所以需要对狗为中间宿主的可疑性进行排查。<br>　　冠状病毒的基因组为一个巨大的线性单股正链RNA，复制过程中容易发生突变，具有演化多样性。而新出现的突变株会表现出更加复杂的性状，能够对宿主更易感，扩大宿主范围或者更易于传播。<br>　　本课题通过流式细胞术和表面等离子共振技术检测发现，狗源ACE2(dACE2)和RBD亲和力较高，仅仅比人源ACE2(hACE2)和RBD的亲和力低了5.6倍。将SARS-CoV-2假病毒和活病毒感染膜上表达dACE2的细胞系，发现这些细胞能够被感染，即dACE2能够介导病毒进入细胞。采用X-ray等结构生物学手段，解析了RBD/dACE2复合物结构。分析复合物结构，找到了蛋白质与蛋白质相互作用的细节，并且最后将目光聚焦在了结合面上。对其中RBDN501和K417这两个关键氨基酸与受体相互作用的功能进行实验验证。<br>　　设计RBDN501Y和K417V/N三个单突变蛋白，将其与受体的亲和力进行测定发现，RBD上417位的氨基酸突变为V或N后对受体亲和力降低，而501位残基突变为Y后大大增强了亲和力。为证明该点突变是否对病毒入侵同样有帮助，将501Y.V1假病毒感染细胞，与对照组野生型假毒感染的细胞数相比，突变株的感染细胞数确实增多了。<br>　　本课题主要解释了RBD结合狗ACE2的分子机制，对S蛋白和受体之间结合面上RBD501和417位点的功能进行了阐述。为中间宿主的排查和病毒传播链的绘制提供了信息。