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摘要背景和目的<br>　　随着再生医学的不断发展进步，构架组织工程毛囊是一种治疗脱发有前景的策略。毛乳头细胞(dermalpapillacells，DPCs)对于毛囊形态发生和周期循环必不可少。构建组织工程毛囊需要大量具有毛发诱导能力的DPCs，但是其在二维培养中会迅速丢失毛发诱导特性，这严重阻碍了组织工程毛囊重建的研究进展。本研究通过层层自组装（Layer-by-Layer,LbL）技术构建可控化的富含ECM及血管的DP微组织(vascularDP)，以更为仿生地模拟体内DPCs三维微环境，以期进一步提高DPCs的毛发诱导效率。<br>　　方法<br>　　1.选用仿生材料明胶(Gelatin)和藻酸钠(Alginate)，逐层包裹DPCs，以构建LbL-DPCs。通过荧光交联、透射电镜(TEM)和Zeta电位等鉴定纳米材料是否成功包裹。活死染色、免疫荧光、qRT-PCR和Westernblot检测LbL包裹对DPCs生物学活性和特性的影响。<br>　　2.通过细胞表面包裹的Alginate与Ca2+化学交联，LbL-DPCs聚集成DP微组织(LbL-DP)。活死染色、免疫荧光、qRT-PCR和Westernblot检测LbL-DP生物学活性和特性。体内移植检测LbL-DP毛发诱导效率。qRT-PCR检测坏死相关标记物表达情况。<br>　　3.将包裹的DPCs和人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)混合后与Ca2+化学交联以构建vascularDP。免疫荧光染色和荧光标记分别检测vascularDP体内外血管化的构建情况。活死染色、免疫荧光、qRT-PCR和Westernblot检测血管化对DPCs生物学活性和特性的影响。体内移植检测vascularDP毛发诱导效率。转录组测序检测及验证血管化防止DP微组织细胞坏死的机制。<br>　　结果<br>　　1.荧光交联、TEM和Zeta电位证实LbL纳米材料的成功包裹。LbL包裹对DPCs的细胞活性和增殖无明显影响。DPCs和LbL-DPCs中特异性标记物ALP、β-Catenin表达水平无明显差异。<br>　　2.在Alginate与Ca2+的化学交联下，成功构建出成球大小可控的LbL-DP。LbL-DP显著上调ALP、β-Catenin的表达。体内实验证实LbL-DP提高毛发诱导效率。活死染色显示LbL-DP内部细胞发生渐进性坏死;qRT-PCR表明LbL-DP中缺氧及坏死相关标记物表达上调。<br>　　3.将LbL-DPCs和LbL-HUVECs混合后与Ca2+化学交联，成功构建vascularDP。vascularDP在体外成功构建血管，体内移植后与宿主血管连接并形成血液灌注。血管化可改善DPCs的细胞活性和增殖，上调ALP、β-Catenin的表达。此外，血管化可进一步提高DPCs的毛发诱导效率。转录组测序证实血管化可防止缺氧诱导的细胞坏死。<br>　　结论<br>　　1.应用LbL技术包裹DPCs，成功为其构建纳米级仿生ECM，LbL包裹不影响DPCs的生物学活性和特性。<br>　　2.通过Ca2+化学交联LbL-DPCs成功构建成球大小可控并富含ECM的LbL-DP。LbL-DP可改善DPCs毛发诱导效率，但LbL-DP内部存在缺氧诱导的细胞坏死。<br>　　3.通过Ca2+化学交联LbL-DPCs和LbL-HUVECs成功构建富含ECM及血管的vascularDP。血管化可改善微组织内部缺氧诱导的细胞坏死，并进一步提高DPCs的毛发诱导效率。